JoVE Encyclopedia of Experiments
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:31 דק' • July 8th, 2025
הניחו חולדה מורדמת עם גפה אחורית מגולחת על כרית חמה מתחת למיקרוסקופ מנתח.
חותכים את העור ומנתחים את הפאשיה, חושפים את קומפלקס גיד אכילס.
הסר את גיד הפלנטריס והוציא קטע קטן מגיד אכילס, ויוצר נגע.
לתפור את החתך ולאפשר לחולדה להתאושש.
אסוף דם מלא מחולדה תורמת שונה מבחינה גנטית, מעורבב עם נוגד קרישה.
צנטריפוגה להשגת שלב תחתון של כדוריות דם אדומות ושלב עליון של פלזמה עשירה בטסיות, או PRP.
העבירו את ה-PRP לצינור וסובבו את טסיות הדם. הסר חלקית את הסופרנטנט והשהה מחדש את טסיות הדם לקבלת PRP מרוכז.
הוסיפו סידן כלורי ודגרו כדי לגרום להפעלת טסיות הדם. לאחר מכן, הזריק את הטסיות המופעלות לאתר התפור של המקבל.
טסיות דם מופעלות משחררות ציטוקינים וגורמי גדילה ספציפיים הגורמים לתיקון גידים באתר הנגע.
התחל בשקילה ותיוג אוזניים של החולדה. לאחר אישור רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן, יש למרוח טיפות מים על קרניות החיה ולהסיר את השיער מהגפה האחורית השמאלית. יש לחטא את העור החשוף בדילול של 1 עד 10 של תמיסת איזו-בטדין, ולהניח את בעל החיים על כרית חימום של 20 מעלות צלזיוס, תחת מיקרוסקופ מנתח.
בתנוחת הצדדים עם הגפה האחורית השמאלית במצב העליון, אחוז בכף הגפה האחורית השמאלית בעזרת מלקחיים, ובצע חתך עור רוחבי של 20 עד 25 מילימטר סביב גיד אכילס, באמצעות מספריים עדינים. נתח את הפאשיה כדי לחשוף את קומפלקס גיד אכילס, והסר את גיד הכף.
חותכים את גיד אכילס לרוחב 5 מילימטרים פרוקסימליים להחדרתו הקלקנאלית, ומסירים חלק באורך 5 מילימטרים. לאחר מכן, השתמש בחוט נספג בתפרים רציפים כדי לסגור את הפאשיה והעור, והנח את החולדה מתחת למקור חום עם ניטור עד להחלמה מלאה. בזמן שבעלי החיים המקבלים מתאוששים, אספו 20 מיליליטר של דם מלא מלב חולדה תורם אחד, לכל חיית ניסוי לתוך צינורות בודדים המכילים 3.2% נתרן ציטראט חומצי.
כדי להשיג את הפלזמה העשירה בטסיות, צנטריפוגה את הדם והשתמש בפיפטה להעברת פלסטיק כדי לקצור בזהירות את השלב העליון המכיל PRP לתוך צינור פלסטיק שני. קבע את נפח ה-PRP שנאסף, ומדוד את ספירת הטסיות במנתח המטולוגיה.
צנטריפוגה שוב את ה-PRP, והעבירו בזהירות את הסופרנטנט לתוך צינור פלסטיק חדש. הנפח הנותר בצינור ה-PRP צריך להיות בסביבות 2/3 מהנפח הנדרש כדי להשיג 2.5 x 106 טסיות למיקרוליטר. לאחר מכן, השעו בעדינות את כדור הטסיות בעזרת פיפטינג. מדוד את ספירת הטסיות של פלזמה מרוכזת עשירה בטסיות דם, והוסף בחזרה את הנפח המתאים של פלזמה דלה בטסיות אוטולוגיות כדי להגיע לריכוז היעד לפי הצורך.
הפעל את טסיות הדם עם 50 מיקרוליטר סידן כלורי למיליליטר PRP למשך כשעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן טען את הטסיות למזרק של 1 מיליליטר המצויד במחט בגודל 21, והזריק 50 מיקרוליטר מהטסיות ישירות לאתר התפר של כל בעל חיים.