ניסוח ננו-חלקיקים טעוני mRNA למטרות חיסון

התחל עם תמיסת פולימר קפואה המכילה פולימרים טעונים חיובית.

מפשירים את תמיסת הפולימר עד שהיא מגיעה לטמפרטורת החדר.

הוסף חיץ ומערבולת לערבוב אחיד, ויוצר תמיסה הומוגנית.

הכנס mRNA מטרה לתמיסת הפולימר ביחס שווה לתגובה אופטימלית.

דגירה כדי לאפשר לפולימרים הטעונים חיובית לקיים אינטראקציה עם קבוצות הפוספט הטעונות שלילית ב-mRNA באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות.

זה מקל על שילוב ה-mRNA במבנה הפולימר, ויוצר ננו-חלקיקים של קומפלקסים של mRNA-פולימר או פוליפלקסים.

העבירו את הפוליפלקסים הללו לצינור המכיל מים ללא RNase.

מערבבים אותם ומאפשרים משקעים של הפוליפלקסים.

הכניסו חיץ המכיל סוכרוז והקפיאו אותו. סוכרוז משמש כחומר קריופרוטקטנט השומר על השלמות המבנית של הפוליפלקסים.

לאחר מכן, בצע ייבוש בהקפאה, כדי להסיר עקבות מים.

אחסן אותו בטמפרטורה נמוכה כמועמד לחיסון mRNA לשימוש עתידי.

להיווצרות פוליפלקסים, יש להפשיר את הפולימרים שהוכנו בעבר C-6 פפטיד פולי-בטא אסטרי אמינו ומערבולת את התמיסה. לאחר פיפטינג תערובת הפולימר למעלה ולמטה, הכינו תמיסה של 12.5 מילי-מולרית בנתרן אצטט. מערבל את התמיסה והמתין 10 דקות.

לאחר מכן, הכינו mRNA ב -0.5 מיליגרם למיליליטר וערבבו על ידי פיפטינג. מערבולת שוב את תמיסת הפולימר. לאחר מכן, ערבבו את תמיסת החומר הגנטי בתמיסת הפולימר ביחס של אחד לאחד בצינור מיקרו-צנטריפוגה, ודגרו את הצינור בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות בבלוק תרמי. לאחר הדגירה, זרז את התערובת עם מים נטולי RNase אחד עד שניים על ידי הוספת הדגימה לצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל את המים.

לאחר מכן, כדי לכלול את חומרי העזר, הוסף HEPES של 20 מילי-מולרי ותמיסת סוכרוז של 4 אחוז באותו נפח כמו התערובת של אסטרי אמינו mRNA ופולי-בטא וערבב על ידי פיפטינג. עבור ליופיליזציה, לאחר הקפאת תמיסת הפוליפלקס במינוס 80 מעלות צלזיוס למשך שעה, בצע את הייבוש הראשוני, ולאחר מכן אחסן מיד את הפוליפלקסים במינוס 20 מעלות צלזיוס כדי למנוע התייבשות.