בניית מודל עכבר אנושי עם חסינות מהונדסת נגד HIV

הכן עכבר מושתל מורדם עם מדוכאי חיסון חמור.

בצע חתך כדי לחשוף את הכליה וליצור חור בקפסולת הכליה.

קח מחט שתל המכילה רקמת תימוס עוברית אנושית ותאים שמקורם בכבד עוברי המרחפים בתערובת חלבון ג'לטיני.

התאים כוללים תאי גזע המטופויאטיים מהונדסים, או HSCs, המבטאים קולטני אנטיגן כימריים, או CARs, המכוונים נגד HIV.

השתל את תרחיף התאים ואת רקמת התימוס מתחת לקפסולה, ולאחר מכן סגור את החתך.

לאחר מכן, הזרקו רטרו-אורביטלי את ה-HSCs המבטאים CAR ואפשרו לעכבר להתאושש.

בכליה, תערובת החלבון הג'לטינית מתפלמרת למטריצה, ושומרת על HSCs באתר ההשתלה.

מטריצת HSCs נודדת לבלוטת התימוס, ומתמיינה לתאי T אנושיים מתפקדים.

בינתיים, HSCs המוזרקים רטרו-אורביטלית מגיעים למח העצם ומתמיינים לתאי B אנושיים מתפקדים, מונוציטים ותאי NK.

מודל העכבר עם מערכת חיסון אנושית נגד HIV מוכן כעת.

שופכים את נתחי התימוס והמדיום מהבקבוק לכלי של 60 מילימטר. צננו כמה קצות פיפטה עם תזוזה חיובית על ידי הנחתם בצינורות פתוחים של 1.5 מיליליטר עם מכסה בורג על קרח. כמו כן, הניחו את כדורי התא ונפח של תערובת חלבון ג'לטיני, כגון מטריג'ל, על קרח.

להרדים את העכברים המקבלים עם חומר הרדמה בהזרקה על פי פרוטוקול מאושר לבעלי חיים. בדוק את רמת ההרדמה של העכבר על ידי סחיטת כף. היעדר תגובה לצביטה מעיד על מישור הרדמה כירורגי.

גלח את הצד השמאלי של כל עכבר מהמותן ועד הכתף, בין מרכז הגב לבטן. תת עורית, הזרקו 6 מיליגרם לק"ג קרפרופן מדולל לכתף או למשולש המפשעתי של בעל החיים. שטפו את צינורית הטרוקר עם PBS בצלחת של 60 מילימטר. בעזרת זוג מלקחיים קהים ומעוקלים, הניחו חתיכת תימוס מהצלחת בקוטר 60 מילימטר ממש בתוך פתח הצינורית, ואז משכו לאחור את הטרוקר כדי לשאוב את הרקמה לתוך הצינורית.

לאחר מכן, השתמש בפיפטה עם תזוזה חיובית ובקצה צונן כדי להוסיף 5 מיקרוליטר של תערובת חלבון ג'לטיני קרה לתוך הצינור עם גלולת התא, וערבב בעדינות כדי ליצור את תרחיף התאים. הכניסו את מתלה התא לתוך פתח הצינורית ומשכו לאט לאט לאחור את הטרוקאר כדי להעמיס את המחט.

ספוג את האזור המגולח של העכבר עם פובידון-יוד ואחריו איזופרופנול שלוש פעמים. קבע את הנקודה הכהה ביותר מתחת לעור, המציינת את מיקום הטחול. הכליה נמצאת כ -5 מילימטרים גב לטחול.

לאחר הבטחת רמת הרדמה מתאימה על ידי היעדר תגובה לצביטת הכפות, השתמש במלקחיים מעוקלים כדי להרים את העור, והשתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך של 15 מילימטר בעור במקביל לטחול. לאחר מכן, בצע חתך דומה בשכבת הצפק שמתחת.

אצל גברים, הכליה נראית בקלות, ולכן מוחצנת פשוט על ידי לחיצה על הבטן. תמכו בכליה עם המוסטט או זוג מלקחיים קהים מעוקלים. אצל נקבות, השחלות נוטות לחסום את הכליה מחילוץ קל. בעזרת המוסטט, הרם את השחלה וחשוף בזהירות את הכליה.

השתמש במלקחיים עם קצה מחט כדי למרוט חור זעיר בקצה האחורי של קפסולת הכליה. החלק את הטרוקר לתוך חור זה ולאורך הכליה עד שפתח הצינורית מכוסה לחלוטין על ידי קפסולת הכליה. הוצא בעדינות את הרקמה מתחת לקפסולת הכליה ומשוך את הטרוקר בחזרה החוצה. השתמש במלקחיים מעוקלים כדי לוודא שחתיכת התימוס לא יוצאת עם המחט.

לאחר מכן, הרם את הצפק בעזרת המלקחיים והשתמש בעדינות בהמוסטט כדי לדחוף את הכליה בחזרה למקומה. קושרים תפר אחד עם קשר כפול עם תפר כירורגי בצפק. כמו כן, הנח שני קליפסים פצועים אוטומטיים כדי לסגור את העור.

כעת, ערבבו את התאים החיוביים ל-CD34 שהועברו ושאבו 0.5 x 10⁶ תאים בנפח של 100 מיקרוליטר למזרק אינסולין. הזרקת תאים אלה לעכבר באמצעות הזרקת ורידים רטרו-אורביטליים.

לאחר ההזרקה, יש לספוג טיפה קטנה של חומר סיכה לעיניים על כל עין ולהניח את העכבר על צדו בחזרה בכלוב. לאחר השתלת כל העכברים, ודא שבעלי החיים חזרו להכרה והם אמבולטוריים לפני החזרתם לחדר הדיור.