יצירת בועיות קרום פלזמה מתאי גזע מח עצם

התחל בתרבית תאי גזע של מח עצם.

הכניסו את מאגר הטריפסין-EDTA כדי לנתק את התאים ולשבור את גושי התאים, וליצור תרחיף של תא בודד.

צנטריפוגה, ואז הסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה במדיום טרי.

העבירו את המתלה למזרק וחברו אותו ליחידת פילטר ממברנה.

דחוף את הבוכנה והשליך את המדיום המכיל סינון.

נתק את המסנן. מלאו את המזרק במדיום טרי. חבר שוב את המסנן ודחף במהירות את הבוכנה.

לחץ הנוזל מאלץ את התא לעבר נקבוביות המסנן.

זה מייצר שלפוחית קרום פלזמה כדורית או PMV.

שלפוחיות אלו מכילות רכיבי תאים ואברונים המוקפים בקרום.

בדוק את המסנן תחת מיקרוסקופ ניגוד פאזה הפוך כדי לצפות בשלפוחיות כדוריות שקופות.

מידות השלפוחיות תואמות את גודל הנקבוביות של קרום המסנן, מה שמאשר את יצירת ה-PMV.

כדי ליצור את ה-PMV, ראשית, תרבית PMSCs של עכברים במדיום תרבית DMEM שלם בבאר אחת של צלחת של שש בארות בחממה לחה ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. כאשר התאים הגיעו למפגש של 90%, יש לשטוף את הבאר עם 0.5 מיליליטר PBS נטול סידן, ולנתק את התאים עם 0.5 מיליליטר של 0.25% טריפסין-EDTA.

לאחר שלוש דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס, הקש על הצלחת בכף היד כמה פעמים כדי להקל על דיסוציאציה של תאים ולהפסיק את העיכול עם 1 מיליליטר של מדיום תרבית. העבירו את התאים לצינור חרוטי של 5 מיליליטר לצנטריפוגה והשעו מחדש את הגלולה ב -4 מיליליטר של מדיום