יצירת בועיות קרום פלזמה מתאי גזע מח עצם

0 views • 3:20 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל בתרבית תאי גזע של מח עצם.

הכניסו את מאגר הטריפסין-EDTA כדי לנתק את התאים ולשבור את גושי התאים, וליצור תרחיף של תא בודד.

צנטריפוגה, ואז הסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה במדיום טרי.

העבירו את המתלה למזרק וחברו אותו ליחידת פילטר ממברנה.

דחוף את הבוכנה והשליך את המדיום המכיל סינון.

נתק את המסנן. מלאו את המזרק במדיום טרי. חבר שוב את המסנן ודחף במהירות את הבוכנה.

לחץ הנוזל מאלץ את התא לעבר נקבוביות המסנן.

זה מייצר שלפוחית קרום פלזמה כדורית או PMV.

שלפוחיות אלו מכילות רכיבי תאים ואברונים המוקפים בקרום.

בדוק את המסנן תחת מיקרוסקופ ניגוד פאזה הפוך כדי לצפות בשלפוחיות כדוריות שקופות.

מידות השלפוחיות תואמות את גודל הנקבוביות של קרום המסנן, מה שמאשר את יצירת ה-PMV.

כדי ליצור את ה-PMV, ראשית, תרבית PMSCs של עכברים במדיום תרבית DMEM שלם בבאר אחת של צלחת של שש בארות בחממה לחה ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. כאשר התאים הגיעו למפגש של 90%, יש לשטוף את הבאר עם 0.5 מיליליטר PBS נטול סידן, ולנתק את התאים עם 0.5 מיליליטר של 0.25% טריפסין-EDTA.

לאחר שלוש דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס, הקש על הצלחת בכף היד כמה פעמים כדי להקל על דיסוציאציה של תאים ולהפסיק את העיכול עם 1 מיליליטר של מדיום תרבית. העבירו את התאים לצינור חרוטי של 5 מיליליטר לצנטריפוגה והשעו מחדש את הגלולה ב -4 מיליליטר של מדיום תרבית טרי. לאחר מכן, חלקו את התאים בין שתי בארות של צלחת חדשה של שש בארות והחזירו את הצלחת לחממת תרבית התאים למשך 24 שעות.

למחרת, קצרו את התאים מבאר אחת על ידי עיכול טריפסין, כפי שהודגם זה עתה, והשעו את הגלולה ב-0.5 מיליליטר של מדיום תרבית טרי לאחר איסוף על ידי צנטריפוגה. טען את התאים למזרק אינסולין של 1 מיליליטר, והצמד את המזרק ליחידת פילטר. לחץ במהירות על הבוכנה כדי לסחוט את התאים דרך המסנן ולהשליך את המדיום המוחצן. לאחר מכן, טען והוציאו 0.5 מיליליטר של מדיום תרבית נוסף דרך המסנן, כפי שהודגם זה עתה, ואספו את המדיום מהשחול השני.

זרעו 150 מיקרוליטר מהמדיום שנאסף לכלי תחתון זכוכית של 35 מיליליטר והניחו לשלפוחיות להתיישב כ -10 דקות. לאחר מכן, אשר את נוכחותם של PMV תחת מיקרוסקופ ניגודיות פאזה הפוך המצויד במצלמת CCD באמצעות עדשה אובייקטיבית פי 20.

11:11

קביעת חלוקה למחיצות של קרום פלזמה חלבונים הקשורים באופן עקיף

Related Videos

0 Views

09:57

בידוד וניתוח של שלפוחיות חוץ-תאיות ניתנות למעקב ומתפקדות מהפלזמה והרקמות המוצקות

Related Videos

0 Views

02:57

יצירת תאים דנדריטיים שמקורם במח עצם: שיטה ליצירת תאים דנדריטיים ממח עצם עכבר

Related Videos

0 Views

02:18

יצירת תאי עצב מתאי גזע פלוריפוטנטיים שמקורם בדם

Related Videos

0 Views

03:58

יצירת תאים דמויי תאי Schwann מתאי סטרומה של מח עצם

Related Videos

0 Views

09:08

Retroviral התמרה של ובתאים מח עצם כדי ליצור תאי T קולטן Retrogenic עכברים

Related Videos

0 Views

09:34

הכנת שלפוחית ​​הממברנה פלסמה מן העצם Mesenchymal תאי גזע עבור פוטנציאל החלפת ציטופלזמה

Related Videos

0 Views

09:05

דור מספר גדול של תאים מיאלואידים אבות ו מבשרי תא דנדריטי ממח העצם מאתר באמצעות תא הרומן מיון אסטרטגיה

Related Videos

0 Views

11:37

פרוטוקול להעברת MicroRNA לתוך למבוגרים הנגזרות מח עצם Hematopoietic תאי גזע כדי לאפשר הנדסה תא בשילוב עם מיקוד מגנטי

Related Videos

0 Views

08:11

דור ללא GM של תאים עצביים שמקורם בדם

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026