העברה פומית של תאי שמרים מותמרים למערכת החיסון של עכבר

התחל עם צינור אוראלי המכיל תרחיף של שמרים אוקסוטרופיים שעברו טרנספורמציה גנטית שאינם מסוגלים לייצר נוקלאובסיס אורציל.

הכנס את צינור הפה לפיו של עכבר מאופק והוביל אותו למטה אל הקיבה.

יש לתת את תרחיף השמרים ישירות לקיבה, מה שמאפשר לו להגיע בסופו של דבר למעי הדק.

המעי הדק מכיל תאי אפיתל, עם כתמי פייר עשירים בתאי חיסון.

תאים מיקרו-קפואים, תאי אפיתל מעיים מיוחדים ליד כתמי פייר, בולעים את תאי השמרים ומפנימים אותם לשלפוחית.

שלפוחיות אלו נעות על פני התאים ומשחררות תאי שמרים לתוך כתם פייר הבסיסי.

בודד את מדבקת פייר ממעי העכבר שהוקרב וקבל תרחיף תאים אחיד.

תרבית תרחיף תאים זה על מדיום סלקטיבי לשמרים המכיל אורציל.

שמרים אוקסוטרופיים מנצלים את האורציל ומתרבים ליצירת מושבות, ומאשרים את מסירתם של תאי שמרים שעברו טרנספורמציה למערכת החיסון של מעי העכבר.

לאחר הכנת תרביות שמרים על פי פרוטוקול הטקסט, השתמש בהמוציטומטר כדי לקבוע את ריכוז התאים, והתאם ל -10 עד התאים התשיעי למיליליטר. גלולה את התאים על ידי צנטריפוגה ב -2,500 פעמים גרם למשך שלוש דקות. לאחר מכן, שפכו את הסופרנטנט, והשעו מחדש את התאים על ידי הוספת הנפח המתאים של מים סטריליים, ופיפטינג בעדינות למעלה ולמטה.

תקן מחט מד מתאימה על מזרק סטרילי של 1 מיליליטר, וטען את דגימת השמרים, תוך ביטול בועות אוויר. טען מזרק נוסף במים סטריליים כדי לפגוע בעכברי הדברה. בעזרת היד הלא דומיננטית, הרימו את העכבר כדי להניף אותו, ובעזרת האצבע המורה והאגודל, אחזו בחוזקה בעור סביב הצוואר. תחוב את הזנב מתחת לאצבע הקטנה. ודא שהאחיזה מאובטחת ומונעת מהעכבר להזיז את ראשו.

לאחר מכן, הכנס בעדינות את מחט הגאווג' לוושט העכבר על ידי זווית המחט לאורך גג הפה והחלק האחורי של הגרון, תוך שמירה מעט משמאל למרכז. המתן עד שהעכבר יבלע את נורת המחט. אם מורגשת התנגדות או שהעכבר מתנשף, הסר בעדינות את המחט ונסה שוב למצוא את הוושט.

לאחר שהעכבר בלע את נורת המחט המכווצת, לחץ בעדינות על בוכנת המזרק כדי לתת את השמרים ישירות לבטן העכבר. הסר בעדינות את מחט הגאווג' מהקיבה והוושט של העכבר והחזיר את העכבר לכלוב. בדוק שהעכבר נושם ונע כרגיל כדי לוודא שהתנועה בוצעה כהלכה.

לאחר הקרבת העכבר על פי פרוטוקול הטקסט, מקם אותו כשהבטן חשופה לחלוטין והשתמש באתנול 70% כדי לרסס את אזור הבטן. בעזרת מספריים, בצע חתך רוחבי דרך הפרווה והעור. לאחר מכן, פתח ידנית את החתך כדי לחשוף עוד יותר את הצפק, רירית הסרוזה הדקה המכסה את איברי הבטן. הרם בעדינות את הצפק ובצע חתך רוחבי כדי לחשוף את המעיים.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים קהים כדי להרחיק בזהירות את המעי הדק מהעורקים המזנטריים, השומן ורקמות אחרות. חשוף את המעי הדק מהקיבה ברבע השמאלי העליון של בטן העכבר לצקום, הכיס הגדול של רקמת המעי בתחילת המעי הגס.

לאחר מכן, בודדו את המדבקות של פייר על ידי חיפוש טלאים עגולים בערך של 1 עד 2 מילימטר של רקמה אטומה לאורך המעי הדק. לאחר מכן, בעזרת מספריים מעוקלים, חתכו את כיפת התיקון של פייר, והשאירו שוליים כדי להבטיח שאף אחת מהרקמות שמסביב לא תיאסף.

העבירו את הטלאים של פייר המנותחים ל-IMDM שלם. לאחר מכן, שפכו את התמיסה עם מדבקות פייר תלויות על מסננת תאים בקוטר 40 מיקרומטר. לאחר שטיפת המדבקות של פייר עם IMDM מלא, השתמש בבוכנה ממזרק של 1 מיליליטר כדי לפרק בעדינות את הרקמה ולאסוף את התאים בצינור של 50 מיליליטר. גלולה את התאים המתוחים, ב-1,800 סל"ד למשך שבע דקות. לאחר מכן המתן ונתח את התאים בהתאם לפרוטוקול הטקסט.