אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:21 דק׳ • July 8th, 2025
קח גידול מלנומה של עכברים המורכב מניטרופילים הקשורים לגידול, או TANs.
TANs מציגים פעילות מוגברת של האנזים ניקוטינאמיד פוספוריבוסילטרנספראז, או NAMPT, הממריץ אנגיוגנזה, התפשטות כלי דם בגידולים ומקל על צמיחת הגידול.
טוחנים את הרקמה ומוסיפים אנזימים כדי לפרק את מטריצת הרקמה, ומשחררים את התאים.
סנן את המתלה דרך מסננת וצנטריפוגה כדי לגלול את התאים.
הוסף מאגר ליזינג כדי ליז את כדוריות הדם האדומות, ואז צנטריפוגה והשליך את הסופרנטנט המכיל פסולת תאים.
הכנסת נוגדנים לחסימת קולטני Fc תאיים, ובכך הימנעות מצביעת חיסון לא ספציפית.
הציגו קוקטייל נוגדנים עם תווית פלואורופור ספציפי לסמני פני השטח על TANs וצבע להבחנה בין תאים מתים.
באמצעות FACS, בודדו את השיזופים הברי קיימא המסומנים בפלואורופור והעבירו אותם למיקרו-פלטה.
הוסף מעכב החוסם את פעילות NAMPT לבארות נבחרות ודגר.
השתמש בתאים כדי להעריך את יכולת הגירוי שלהם לאנגיוגנזה. ה-TANs שטופלו במעכבים מראים אנגיוגנזה מופחתת בהשוואה ל-TANs שלא טופלו.
לבידוד נויטרופילים הקשורים לגידול, הנח חמישה גידולים לבאר לבארות בודדות של צלחת סטרילית של שש בארות, בזמן שהם נקצרים, והשתמש במספריים סטריליים כדי לטחון את הגידולים לחתיכות של 2 עד 3 מילימטרים. לאחר מכן, עכל את שברי הגידול עם 1 מיליליטר של קולגנאז מבוסס דיסק, תמיסת DNase I למשך 45 דקות ב-37 מעלות צלזיוס ו-5%
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים