אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:12 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בתרחיף של Mycobacterium bovis BCG, שטופל בחומר פעילי שטח לא יוני, כדי למנוע גוש חיידקים.
לאחר מכן, הוסף מגיב ביוטינילציה ודגירה.
מגיב ביוטינילציה זה, קומפלקס של ביוטין המורכב לקישור פונקציונלי, מקל על קשירת מולקולות ביוטין לחלבוני פני השטח של חיידקים, וסימון חיידקים.
לאחר הדגירה, צנטריפוגה את תרחיף החיידקים המסומן בביוטין להסרת מגיב ביוטינילציה שלא הגיב.
השעו מחדש את החיידקים במאגר. הוסף תמיסה של חלבון היתוך אבידין, חלבון רקומביננטי המורכב מתחום אנטיגן מטרה המאוחה לאבידין מונומרי.
במהלך הדגירה, אבידין נקשר לביוטין, מה שמקל על שינוי פני השטח של החיידקים עם אנטיגנים מטרה.
צנטריפוגה את התרחיף להסרת חלבוני היתוך לא קשורים.
השעו מחדש את החיידקים המצופים אנטיגן במאגר המכיל חומר פעילי שטח לא יוני. ציפוי האנטיגן על החיידקים יכול לשפר את תכונתו לעורר תגובות חיסוניות.
עבוד בארון בטיחות ביולוגית באמצעות ציוד מגן אישי מכיוון ש-BCG הוא פתוגן ברמה II.
כדי לביוטינילציה של פני השטח של תאי BCG, ראשית, גדלו את התאים על פלטפורמת שייקר לצפיפות המתאימה. אסוף כמיליארד תאים, ושטוף אותם שלוש פעמים באמצעות 500 מיקרוליטר PBST נטול אנדוטוקסין קר כקרח. לאחר מכן, סובב את התאים והשהה אותם ב-PBS סטרילי נטול אנדוטוקסין. לאחר מכן, הכינו ביוטין טרי של 10 מילי-מולרית Sulfo-NHS SS במים מסוננים סטריליים. לאחר מכן
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים