JoVE Encyclopedia of Experiments
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:25 דק' • July 8th, 2025
קח שקופית תא מרובת בארות המכילה חד-שכבות מיקרוגליה.
בבדיקה היטב, מצפים את התאים ב-β-גלוקן. באר הבקרה חסרה β-גלוקן. דגירה.
בבאר הבדיקה, β-גלוקנים, דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן, נקשרים לקולטנים ספציפיים במיקרוגליה, וגורמים לפגוציטוזיס β-גלוקן.
זה מפעיל את המיקרוגליה, מייצר ומשחרר מולקולות ביו-אקטיביות כגון מחמצנים תגובתיים וציטוקינים לתקשורת.
אסוף את המדיה המכילה מולקולות ביו-אקטיביות מהבארות וסנן אותן כדי להסיר פסולת ו-β-גלוקן.
הקפיאו את המדיה בטמפרטורות נמוכות כדי לשמר את הפעילות הביולוגית של המולקולות הביו-אקטיביות.
לאחר מכן, יש להפשיר ולהוסיף את המדיה לשקופית מרובת בארות המכילה חד-שכבות של תאי סרטן המוח. דגירה.
המולקולות הביו-אקטיביות מפעילות מסלולי איתות תאים, מפחיתות את התפשטות התאים הסרטניים וגורמות לאפופטוזיס.
התפשטות מופחתת של תאי סרטן ואפופטוזיס מוגבר מציעים β-גלוקנים כחומרים המקדמים תכונות אנטי-גידוליות של מיקרוגליה כנגד תאי סרטן המוח.
הפעל את המיקרוגליה על ידי ציפוי תאי המיקרוגליה BV-2 למשך 72 שעות בריכוז של 0.2 מיליגרם למיליליטר של ארבעה בטא-גלוקנים שונים שבודדו מ-P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum ו-H. erinaceus. לאחר 72 שעות, אספו את הסופרנטנט בעזרת פיפטה, והעבירו את הנפח הנותר דרך פילטר מזרק של 0.20 מיקרומטר. לאחר מכן, הקפיאו את הסופרנטנט בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות לפחות. כדי לטפל ב-GL261 עם המדיום המותנה במיקרוגליה המופעל מראש, הוסף 250 מיקרוליטר של מדיום מיקרוגליה שטופל בבטא-גלוקן ל-80% תאי GL261 קונפלואנטים למשך 72 שעות.