פיתוח מודל תרבית תאים משולשת של מחסום הדם-מוח האנושי

התחל בהוספת פריציטים לחלק התחתון של תוספת הבאר.

מכסים את הכנס הבאר בצלחת תרבות ודוגרים.

פריציטים נצמדים לקרום של הכנסת הבאר ויוצרים שכבה חד-תאית או חד-שכבתית.

קח צלחת תרבות נוספת.

הוסף אסטרוציטים אנושיים לבאר במדיום מתאים. לאחר מכן, דגרו על הצלחת.

אסטרוציטים נצמדים לתחתית הבאר ויוצרים שכבה חד-שכבתית.

זורקים את המדיום ומוסיפים אסטרוציטים טריים ומדיום פריציט.

כעת, קח את צלחת התרבות המכילה את הכנסת הבאר עם שכבת הפריציטים.

הפוך את הצלחת והעביר את תוספת הבאר לבאר המכילה את שכבת האסטרוציטים.

הוסף את תאי האנדותל של המוח האנושי לצד העליון של הכנסת הבאר והדגירה.

תאי האנדותל מתחברים לבאר ויוצרים מערכת תרבית תאים משולשת הדומה למחסום הדם-מוח, ממשק חיוני המפריד בין זרם הדם למוח.

התחל בטיפוח HBVP בצלוחיות תרבית T75 עם משטח פעיל להדבקת תאים בתוך חממת פחמן דו חמצני של 5% ב-37 מעלות צלזיוס עד להתכנסות. לאחר שמגיעים למפגש, שאפו את מדיום הטפיל הישן ושטפו את התאים עם 5 מיליליטר PBS חם של Dulbecco. שאפו את ה-PBS של הדולבקו ונתקו את התאים מהבקבוקון, באמצעות שילוב של 4 מיליליטר של תמיסת טריפסין-EDTA חמה ו-1 מיליליטר של PBS של דולבקו.

דגרו את הבקבוק למשך 5 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס בחממת פחמן דו חמצני. צפה במיקרוסקופ כדי לאשר אם התאים מנותקים מהבקבוק. הוסף לבקבוק 5 מיליליטר של מדיום טפיל חם, המכיל 2% F