מיצוי חלבונים מתאי עצב

קח תרבית תאים המכילה תאי סרטן עצביים המחוברים לכיסוי ושמור אותה בתנאים קרים.

הסר את מדיום התרבות ושטוף שוב ושוב את התאים עם מאגר פוספט קר כדי לחסל את המדיום השיורי.

הוסף מאגר ליזה המכיל ריכוז נמוך של חומרי ניקוי לא יוניים ומעכבי פרוטאז.

חומר הניקוי הלא יוני משבש את קרום התא כדי ליזום ליזה.

בינתיים, מעכבי הפרוטאז חוסמים את האנזימים הפרוטאוליטיים התאיים, ומגנים על החלבונים מפני פירוק אנזימטי.

לאחר מכן, השתמש במגרד תאים כדי לעקור את התאים הליזים חלקית מהכיסוי.

העבירו את התוכן לצינור המכיל את מאגר הליזיס.

בתנאים קרים, השתמש בהומוגנייזר כדי לבצע ליזה מכנית של התאים, מה שמבטיח ליזה מלאה של התאים ושחרור חלבון.

צנטריפוגה של התא ליזאט.

יש לאסוף את הסופרנטנט לתוך שפופרת טרייה.

החלבונים שחולצו מתאי הגידול העצבי מוכנים כעת לניתוח נוסף.

לאימות ביטוי חלבון, 48 שעות לאחר הטרנספקציה, הניחו את כלי התרבית על קרח ושטפו את התאים פעמיים עם PBS. טפל בתאים בכל צלחת עם 200 עד 400 מיקרוליטר של מאגר ליזה, והשתמש במגרד תאים כדי להסיר את התאים מהכיסויים.

העבירו את התאים המנותקים מכל צלחת לצינורות מיקרו-צנטריפוגה בודדים, והפרידו עוד יותר את התאים עם הומוגנייזר מתחת לקרח. לאחר דקה אחת, גלולה את חלקי התאים ההומוגניים על ידי צנטריפוגה.