הערכת פעילות מושכת או דוחה של חלבונים באמצעות נוירונים בהיפוקמפוס

התחל עם צלחת המכילה מטריצת סיליקון בעלת מספר ערוצים קטנים המחוברים ליציאות כניסה ויציאה.

הזריק לחלבון הבדיקה פעילות דוחה דרך הכניסה כדי למלא את התעלות.

דגירה כדי לאפשר היצמדות חלבון באזור התעלה, יצירת אזורי חלבון בדיקה ולאחר מכן שטוף.

הסר את המטריצה, כסה את האזור המצופה בחלבון בקרה בעל פעילות אטרקטיבית, ודגר.

זה מקל על היצמדות חלבון הבקרה לאזורים הריקים בין אזורי חלבון הבדיקה, ויוצר אזורי חלבון בקרה עם דפוס פסים מתחלף, ולאחר מכן לשטוף.

מוסיפים למינין לציפוי אזור הפסים ואז שוטפים.

זרעו את האזור המצופה בהשעיה חד-תאית של נוירונים בהיפוקמפוס ודגרו.

באזור חלבון הבדיקה, הנוירונים מקיימים אינטראקציה עם החלבונים, ומפעילים אותות הגורמים לתאי העצב להדוף, ומעכבים את התקשרותם.

לעומת זאת, אינטראקציות עצב-חלבון באזור חלבון הבקרה מקדמות התקשרות עצבית, ותומכות בצמיחה ובהרחבת האקסון שלהם.

הכן את החלבונים הרקומביננטיים המסומנים בפלואורסצנט ב- PBS. הכינו 25 מיקרוליטר לכל צלחת פסים. נותנים לתערובת לדגור בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. לאחר מכן, עבור כל מנה, טען מזרק בגודל 22 עם 25 מיקרוליטר חלבון מדולל והזריק אותו דרך החור הקטן בצד המטריצה.

הימנע מהזרקת בועות אוויר למטריצות מכיוון שהן יפריעו לקשירת החלבונים שלך למחלה.

כעת, דגרו את הכלים למשך 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס בחממת תרביות תאים. לאחר הדגירה,