הזרקה תוך-מוחית לניתוח התפלגות ציטומגלווירוס מורין במוח עכבר יילודים

קחו תרחיף של ציטומגלווירוס עכברי, מהונדס גנטית כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר, המאפשר הדמיה.

טען את המתלה למזרק בעזרת מחט מחוברת.

לאחר מכן, הרדמו גור עכבר על ידי הנחתו על קרח.

זהה את מקום ההזרקה על ראש הגור.

הכנס את המחט בניצב למשטח הגולגולת עד שהיא מגיעה לחדר הצדדי, לנוזל מוחי או לחלל מלא CSF במוח.

הזריק את התרחיף לחדר הרוחבי.

אפשרו לגור להתאושש.

הנגיף המוזרק מסתובב דרך ה-CSF החדרי ומגיע לתאי האפנדימל של אזור השוליים ולתאי האפיתל של מקלעת הכורואיד.

הנגיף נצמד לקולטני פני השטח על תאים אלה, מפנים, עובר שכפול ומתפשט מתא לתא, ויוצר זיהום חריף במקלעת הכורואיד, באזור השוליים ובאזור התת-חדר.

התחל בעיקור מזרק של 10 מיקרוליטר ומחט בגודל 27 עם 70% אלכוהול. לאחר מכן, טען 5 מיקרוליטר של תמיסת הזרקת ציטומגלווירוס עכברי או מיקרו-חרוזים פלואורסצנטיים לתוך המחט על ידי משיכה בזהירות של הבוכנה של המזרק.

לאחר הרדמה ושיתוק של עכבר יילוד P0.5 על ידי הנחתו על קרח למשך שלוש עד ארבע דקות, השתמש בשיטת תגובת צביטת הבוהן כדי לקבוע את עומק ההרדמה. סמן את מקום ההזרקה על העכבר המורדם עם עט מעבדה לא רעיל במיקום של כ-0.7 עד 1.0 מילימטר לרוחב התפר הסגיטלי, ו-0.7 עד 1.0 מילימטר זנב מהברגמה היילודה. תרשים זה מציג את האתר ביתר פירוט.

להשוואה, סמן 2 מילימטרים מקצה המחט בטוש לא רעיל. לאחר מכן, הכנס את המחט בעומק 2 מילימטרים, בניצב למשטח הגולגולת באתר ההזרקה המסומן. לאחר מכן, הזרקו לאט 5 מיקרוליטר של ציטומגלווירוס עכברי לחדר הצדדי מבלי לפתוח את הקרקפת.

בקבוצה אחרת של עכברים, הזריקו תמיסה של 5 מיקרוליטר המכילה מיקרו-חרוזים פלואורסצנטיים באותה שיטה. לאחר ההזרקה, הניחו למחט להישאר במקומה למשך 10 עד 20 שניות כדי למנוע זרימה חוזרת. לאחר מכן, הסר לאט את המחט. אפשר לבעלי החיים המוזרקים להתאושש במשך 5 עד 10 דקות במיכל חם עד להחזרת התנועה והתגובה הכללית.