הערכת תגובה בין-עצבית לרמזים כימותרפיים מתאי אנדותל פריוונטריקולריים

תקן תוספת תרבית בת שלושה תאים בכלי מצופה פולימר לחיבור תאים.

הפוך את המנה, סמן את התא האמצעי וכוון אותה מחדש. הוסף מדיום המכיל אינטרנוירונים לתא זה.

הוסף מדיום המכיל תאי אנדותל פרי-חדריים אנושיים, או PVECs, תאי כלי מוח, לאחד התאים החיצוניים.

בתא חיצוני אחר, הוסף מדיום המכיל תאי אנדותל שאינם פרי-חדריים כבקרה.

הוסף מדיום תרבית משותפת לתבשיל כדי למנוע ייבוש פולימרי. דגירה להיצמדות תאים.

פרק את התוספת, וצור טלאים מלבניים של תאים עם מרווחים קטנים ללא תאים בין כל סוג תא.

התרעננו עם מדיום התרבות המשותפת ודגירה.

תאי אנדותל מעוררים אינטרנוירונים לנדוד לחללים נטולי תאים.

בינתיים, PVECs משחררים מושכים כימיים המשפרים את הנדידה של אינטרנוירונים לעבר התיקון המכיל PVEC.

נדידה גבוהה יותר של אינטרנוירונים לעבר מדבקת ה-PVEC מאשר מדבקת תאי הבקרה מאשרת את התגובה הבין-עצבית לרמזים כימו-אטרקטיביים מה-PVECs.

כדי לבצע את בדיקת הכימותרפיה, הנח תוספת תרבית בת שלוש בארות במרכז צלחת 35 מילימטר מצופה פולי-L-אורניתין ולמינין. הפוך את המנה הפוכה וסמן את הגבול סביב התא האמצעי של התוספת באמצעות טוש קבוע עם קצה דק במיוחד.

זרע 30,000 אינטרנוירונים GABAergic ב-70 מיקרוליטר של מדיום עצבי בתא האמצעי. לאחר מכן, זרעו 10,000 תאי אנדותל פרי-חדריים, ו-10,000 תאי אנדותל בקרה ב-70 מיקרוליטר של המדיום שלהם בשני התאים החיצוניים.

הוסף 1 מיליליטר של מדיום קו-קולטורציה לאורך צד המנה כדי למנוע התייבשות הציפוי על התבשיל. לאחר 48 שעות, הסר את התוספת, ודגר על התאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 36 שעות.