אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:55 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צינור המכיל חרוזים מגנטיים שטופלו מראש המצופים בנוגדנים ספציפיים לחלבון מטרה המקושר ל-DNA.
הוסף ליזט נוירון מוטורי המכיל שברי DNA ודגירה בעצבנות.
שברי ה-DNA מקיימים אינטראקציה עם חרוזים מצופים נוגדנים, ויוצרים קומפלקסים של חרוזים-DNA.
צנטריפוגה כדי לאסוף את הנוזל מהכובע ולהניח אותו על מפריד מגנטי כדי לזרז את קומפלקסי החרוזים-DNA.
הסר את הסופרנטנט המכיל מקטעי DNA לא קשורים.
הציגו מאגר ליזה מבוסס חומר ניקוי כדי להמיס שברי DNA שאינם קשורים במיוחד.
צנטריפוגה ולבצע את ההפרדה המגנטית, ואז להסיר את הסופרנטנט.
שטפו עם מאגר מלח גבוה כדי לשבש אינטראקציות לא ספציפיות. צנטריפוגה, לבצע את ההפרדה המגנטית ולהסיר את הסופרנטנט.
שטפו עם מאגר LiCl כדי להסיר את האינטראקציות הלא ספציפיות שנותרו. צנטריפוגה, לבצע את ההפרדה המגנטית ולהסיר את הסופרנטנט.
לבסוף, שטפו עם מאגר Tris-HCl, צנטריפוגה ובצעו את ההפרדה המגנטית.
הסר את הסופרנטנט ואסוף את החרוזים המכילים את קומפלקסי חלבון המטרה-DNA.
כדי להתחיל את המשקעים החיסוניים של הכרומטין, שטפו את החרוזים המצופים בנוגדנים ב-1 מיליליטר של תמיסת חסימה. הנח את הצינור המכיל את החרוזים המצופים בנוגדנים על משטח נדנדה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. לאחר סיבוב קצר, הנח את הצינור על מתלה מגנטי והסר את הסופרנטנט.
השעו מחדש את החרוזים המצופים בנוגדנים ב-50 מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים