אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:08 דק׳ • July 8th, 2025
קח קטעי אורגנואידים קבועים במוח המוחי המורכבים מסוגים שונים של נוירונים במוח.
שטפו את החלקים במאגר כדי להסיר שאריות של חומרי הטבעה.
דגירה בגליצין כדי לחסום אתרים תגובתיים שיוריים מקיבוע, ולהפחית את הקישור הלא ספציפי במהלך צביעה חיסונית.
הוסף חומר ניקוי לא יוני כדי לחלחל לתאים.
שוטפים עם חיץ, מסירים את חומר הניקוי העודף.
כעת, יבש את השקופית. העבירו אותו לכלי צביעה חיסונית עם נייר ספוג חוצץ כדי למנוע ייבוש רקמות.
החל תמיסת חסימה שנקשרת לאתרים לא ספציפיים בתאי העצב.
הסר את פתרון החסימה. דגירה עם נוגדנים ראשוניים, הנקשרים לאנטיגנים ממוקדים בתוך נוירונים במוח הקטן.
לשטוף עם חיץ, להסיר נוגדנים לא קשורים.
דגירה עם נוגדנים משניים הקשורים לפלואורופור כדי לקשור נוגדנים ראשוניים הקשורים לאנטיגן.
לאחר מכן, שטפו עם חיץ, והסירו נוגדנים לא קשורים.
הוסף צבע כדי להכתים את גרעיני התא.
באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, דמיין סמנים המתבטאים בנוירונים במוח הקטן, המעידים על התבגרות אורגנואידית.
שטפו את שקופיות המיקרוסקופ המכילות את חלקי האורגנואידים עם 50 מיליליטר של 1X PBS למשך חמש דקות. לאחר מכן, העבירו את השקופיות לצנצנת קופלין המכילה 1X PBS טרי. מעבירים את השקופיות לצנצנת קופלין המכילה 50 מיליליטר גליצין טרי, ודוגרים 10 דקות בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, העבירו את השקופיות לצנצנת קופלין המכילה 50 מילילי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים