פיתוח מודל חוץ גופי של זיהום בנגיף זיקה באורגנואידים מוחיים

קח צלחת מרובת בארות המכילה אורגנואידים מוחיים אנושיים במדיום אינדוקציה עצבית.

האורגנואידים מכילים תאי גזע, תאי גליה רדיאליים, תאי אב עצביים או NPCs, ונוירונים המסודרים בתבנית רדיאלית הנקראת רוזטה, המחקה את המוח המתפתח.

הסר את המדיום ושטוף את האורגנואידים בעזרת חיץ.

הוסף את נגיף הזיקה התלוי במאגר לבארות הבדיקה ורק את המאגר לבארות הבקרה.

לדגור, מה שמאפשר לנגיף להיקשר לקולטנים שלו על ה-NPCs ולהפנים.

שטפו כדי להסיר וירוסים לא מופנמים, ואז הוסיפו מדיום אינדוקציה עצבי טרי ודגרו.

הנגיפים המופנמים משתמשים במנגנון התא המארח כדי ליצור חלקיקים נגיפיים חדשים.

ריבוי ויראלי מעורר תגובת לחץ תאית הגורמת לאפופטוזיס, ומפחיתה את מספר ה-NPCs הזמינים להתפתחות אורגנואידים.

עם הזמן, האורגנואידים הנגועים מציגים גודל מופחת ומורפולוגיה משובשת, המשקפת התפתחות מוחית חריגה בבני אדם נגועים בנגיף הזיקה.

הביאו את תמיסת המלח המאוזנת 1X של ארל, 1X PBS ומדיום אינדוקציה עצבית ל-37 מעלות צלזיוס באמבט מים חמים. לאחר מכן, יש לדלל את נגיף הזיקה בריכוז ידוע בתמיסה של 1X Earle לריבוי היעד של ההדבקה שהוא בדרך כלל בין 0.1 ל-10. בעזרת פיפטה P200, הסר בזהירות את כל המדיום מכל אורגנואיד היטב, ולאחר מכן, שטוף במהירות את האורגנואידים עם 200 מיקרוליטר PBS 1X חם.

כאשר מוציאים את המדיה מכל באר, חשוב לא לגעת באורגנואיד או לשאוב אותו לתוך הפיפטה. זה יכול לגרום לנזק בלתי הפיך לאורגנואיד. אם זה קורה, עדיף להשליך את האורגנואיד.

לאחר מכן, הסר בזהירות את כל הנוזלים שנותרו מכל באר אורגנואיד באמצעות פיפטה P200 חד-ערוצית. לאחר מכן, הוסיפו במהירות 50 מיקרוליטר של תמיסת ארל 1x לזיהום מדומה או תמיסת נגיף זיקה לכל באר. ודא שכל אורגנואיד שקוע לחלוטין. בסיום, החזירו את הצלחת לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים.

לאחר השלמת חשיפה ויראלית. שוטפים כל באר של האורגנואידים עם 200 מיקרוליטר PBS. אפשר לאורגנואידים להתיישב למשך 15 שניות, ולאחר מכן הסר את ה-PBS באמצעות פיפטה P200 חד-ערוצית. לבסוף, הוסיפו 200 מיקרוליטר של מדיום אינדוקציה עצבי טרי לכל באר, והניחו את הצלחת בחזרה לתוך החממה.