אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:20 דק׳ • July 8th, 2025
הניחו מוחות דרוזופילה מסוג בר ומוטנטי בתמיסה המכילה מקבע וחומר ניקוי. דגירה עם נדנדה עדינה.
הקיבוע שומר על מורפולוגיה של הרקמות, ואילו חומר הניקוי מחלחל לקרומי התאים.
אפשרו למוח להתייצב, ואז הסירו את התמיסה.
שוטפים את הטישו עם חיץ.
הוסף תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הסר את התמיסה והוסף נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון ספציפי המווסת את ההתפתחות האקסונלית בגוף הפטרייה של המוח, או MB, נוירונים.
דגירה כדי לקדם קשירת נוגדנים.
יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים.
שטפו שוב כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, ואז השעו מחדש את המוח במדיום הרכבה.
הרכיבו את המוחות על מגלשת גשר ודמיינו אותם תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
בהשוואה לסוג הפראי, המוחות המוטנטיים מציגים פנוטיפ פגום, עם הקרנות שגויות אקסונליות ואונות MB חסרות.
תחת המיקרוסקופ, השתמש בפיפטה P200 כדי להעביר 10 עד 15 מוחות מנותחים באותו גנוטיפ לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה של 0.5 מיליליטר מלא ב-4% פרפורמלדהיד מדולל ב-PTN. לאחר מכן, דגרו על המוחות למשך 20 דקות עם נדנוד איטי בטמפרטורת החדר. לאחר הקיבוע, אפשרו למוח להתיישב בתחתית הצינור, ואז הסירו את הקיבוע.
לאחר מכן, בצע שתי כביסות מהירות עם 500 מיקרוליטר PTN לכל כביסה. החלף את ה-PTN ברגע שהמוח מתיישב בצי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים