JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:28 דק' • July 8th, 2025
קח זחלי דג זברה מורדמים בכלי מרופד בג'ל אגרוז וודא שהמוח פונה כלפי מעלה להזרקה.
מקמו את הצלחת מתחת למיקרוסקופ כדי לדמיין את חדרי המוח, שהם חללים מלאים בנוזל בתוך המוח המתפתח.
קח מחט מיקרו-הזרקה המכילה תמיסה של ליפופוליסכרידים, או LPS, מרכיב חיידקי כדי לעורר תגובה חיסונית.
מקם את המחט מעל טקטום המוח, אזור המכיל נוירונים ותאי חיסון תושבים, במיוחד מיקרוגליה.
לנקב את המוח עם המחט ולהזריק את תמיסת ה-LPS לחדר.
מיקרוגליה ברקמה שמסביב נקשרת ל-LPS באמצעות קולטנים דמויי טול.
הקישור מעורר שחרור של ציטוקינים פרו-דלקתיים, המגייסים נויטרופילים לאתר, מה שמוביל לדלקת עצבית.
נויטרופילים מייצרים התפרצויות של מיני חמצן תגובתיים ומשחררים אנזימים פרוטאוליטיים, וכתוצאה מכך מוות עצבי.
העבירו את הזחלים המושרים על ידי דלקת עצבית למדיום תרבית כדי לשמור עליהם לבדיקות במורד הזרם.
הגדר את המיקרומניפולטור כך שקצה המחט של מנגנון המיקרו-הזרקה יהיה באותו שדה ראייה כמו הזחלים בהגדלה גבוהה. ממיסים תמיסה של 2% אגרוז במים מזוקקים כפולים בעזרת מיקרוגל. שופכים את האגרוז המותך לכלי פלסטיק. השתמש בפיפטה להעברה מפלסטיק כדי להעביר את הזחלים המורדמים למרכז צלחת פלסטיק מצופה אגרוז 2%.
כוון את הזחלים המורכבים כשצד המוח כלפי מעלה לגישה למחט. התאם את ההגדלה של המיקרוסקופ כך שמבנה חדר המוח של דג הזברה יוצג בבירור בשדה הראייה. הנח את המחט בזהירות מעל טקטום המוח. נקו את אזור המוח עם 70% אתנול, ונקבו את העור של מוח דג הזברה עם קצה המחט באיטיות באמצעות המיקרומניפולטור.
לחץ על דוושת כף הרגל כדי להוציא ננוליטר אחד של 1X PBS או ריכוזים שונים של ליפופוליסכריד. העבירו את הזחלים למדיום E3 נקי מיד לאחר ההזרקה.