מידול מוות עצבי של חמצן תגובתי בתאי עצב של גרגרי המוח הקטן בעכבר

קח תרבית של נוירונים גרגירי מוח ראשוניים של עכבר.

הוסף מדיה המכילה מי חמצן, זן חמצן תגובתי או ROS, ודגר לזמן קצר.

מי חמצן מתפזרים לתאים ומומרים לרדיקלים חופשיים בעלי תגובה גבוהה.

רדיקלים אלה גורמים לחמצון שומנים, ומסכנים את שלמות קרום התא.

בנוסף, הרדיקלים גורמים לשינויים חמצוניים בחלבונים תאיים, ופוגעים בתפקודם.

יתר על כן, הם גורמים לשבירת DNA, מה שמוביל לחוסר יציבות גנומית.

הרדיקלים גורמים גם לנזק חמצוני לאברונים תוך-תאיים, כולל מיטוכונדריה.

בתגובה, המיטוכונדריה הפגועה משחררת ציטוכרום c, שנקשר לפקטור המפעיל פרוטאז אפופטוטי -1, ומפעיל היווצרות אפופטוזום והמרה של פרו-קספאז-9 לקספאז-9 פעיל.

Caspase 9 מפעיל קספזות תליין, מבקע עוד יותר חלבונים תאיים ומוביל למוות עצבי אפופטוטי.

החלף את המדיה במדיה טרייה ונטולת מי חמצן כדי לעצור את מפל האיתות.

למוות תאי המושרה על ידי ROS, טפל בתאי העצב במי חמצן בטמפרטורה של 75 עד 100 מיקרומולר למשך חמש דקות. לאחר חמש דקות, העבירו אותו למדיה המותנית מתרבויות מקבילות.

בשל חוסר היציבות של מי חמצן, יש לייעל את הריכוז לרמה הגורמת בין 50% ל-70% מוות תאים לאחר 24 שעות. ריכוז זה הוא בדרך כלל בין 75 ל -100 מיקרומולר.