צביעת אימונופלואורסצנטיות להדמיית תאי גזע עצביים מתרבים באזורי מוח עכבר

קחו קטעי מוח קבועים של עכבר המכילים תאים עצביים, כולל תאי גזע עצביים מתרבים המסומנים ב-EdU, אנלוגי תימידין.

מתאר את החלקים בסימון הידרופובי כדי למנוע התפשטות תמיסה.

הוסף חומר ניקוי כדי לחלחל את הרקמה. שטפו כדי להסיר עודפי חומר ניקוי.

הוסף פלואורופור כדי לתייג את ה-EdU. הסר את עודפי הפלואורופורים.

באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, אשר צביעה נכונה של התאים המסומנים ב-EdU.

החל חוצץ חוסם המכיל חלבונים כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים. הסר את עודפי החלבונים.

דגירה עם נוגדנים ראשוניים הנקשרים לחלבונים ספציפיים בתאי גזע עצביים. הסר את הנוגדנים הלא קשורים.

הוסף נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור כדי לקשור את הנוגדנים הראשוניים. שטפו את הנוגדנים הלא קשורים.

מכתימים את הגרעינים בצבע ומסירים את עודפי הצבע.

הסר את הסימון ההידרופובי, החל אמצעי הרכבה והנח כיסוי.

בעזרת מיקרוסקופ קונפוקלי, התבונן בקטעים כדי לדמיין את תאי הגזע העצביים המסומנים בסמכות.

כדי להכתים את חלקי הרקמה באנלוגי תימידין, הסר את חלקי הרקמה ממאגר הציטראט. הניחו לקטעי הרקמות להתייבש ולהיצמד לחלוטין לשקופיות לפני שציירו גבול בעט הידרופובי. לאחר מכן, חדור את החלקים עם מאגר חדירות למשך 20 עד 30 דקות. שטפו את החלקים פעמיים באמצעות TBS Triton למשך 5 דקות בכל פעם. לאחר מכן, הכינו תמיסת תגובת EdU.

דגרו את החלקים בתמיסת התגובה של EdU למשך