יצירת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

להזריק לפפטידים שמקורם במיאלין אדג'ובנט ליד בלוטות הלימפה ההיקפיות של עכבר מורדם.

המצומדים של פפטיד-אדג'ובנט מפעילים את התאים מציגי האנטיגן, או APCs, המזהים ומעבדים את הפפטידים.

לאחר מכן ה-APCs נודדים לבלוטות הלימפה ומפעילים את תאי ה-T האוטוראקטיביים.

הזריק מעת לעת את רעלן השעלת תוך צפק, מה שמשבש את הצמתים ההדוקים בין תאי האנדותל ומגביר את חדירות מחסום הדם-מוח.

תאי ה-T האוטוראקטיביים מסתובבים בדם וחוצים את מחסום הדם-מוח כדי להיכנס לרקמת המוח.

תאים אלה מזהים את הפפטידים על מעטפת המיאלין ומשחררים את הציטוקינים.

ציטוקינים אלה מגייסים מקרופאגים ותאי B לאתר.

מקרופאגים משחררים מיני חמצן תגובתיים הפוגעים באוליגודנדרוציטים המייצרים מיאלין, בעוד שתאי B מקיימים אינטראקציה עם תאי T, מופעלים ומייצרים נוגדנים עצמיים המכוונים למעטפת המיאלין.

זה מוביל לדמיאלינציה, ופוגע בהולכה העצבית.

הרם את זנב העכבר; ירידה הדרגתית מצביעה על נזק עצבי, המסמן את הופעת דלקת המוח האוטואימונית, או EAE.

התחל הליך זה בהרדמה של עכברי C57BL/6 ששוכנו בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. תקן את העכבר המורדם ביד אחת והזריק 30 מיקרוליטר של פפטיד MOG בתחליב אדג'ובנטי פלואורסצנטי שלם תת עורי לכל אחד מצידי הרגל האחורית בסמיכות לבלוטות הלימפה המפשעתיות.

כעת, הניחו את העכבר על בטנו והזריקו 20 מיקרוליטר של תחליב פפטיד MOG לרקמת השומן הרכה משמאל ומימין בשורש הזנב. כמו כן, הזריקו טיפה קטנה של האמולסיה לצוואר העכבר. הזרקו 100 מיקרוליטר של תמיסת רעלן שעלת תוך צפקית לעכבר. החזק את ראש העכבר מתחת למרכז הגוף כדי למנוע הזרקה למעי.

החלף את דיאטת התחזוקה בתזונת הרבייה על מנת לספק לעכברים מזון בעל תכולת אנרגיה גבוהה יותר לפני שהם סובלים מהמחלה הקלינית הצפויה. חזור על הזרקת רעלן השעלת 48 שעות לאחר הטיפול הראשון.

בדוק את מצבם הבריאותי של עכברי EAE בכל בוקר על ידי הצצה לתוך הכלובים. ציון עכברי EAE בכל אחר צהריים. הוציאו מהכלוב כל עכבר בודד שנכלל בניסוי EAE, ובדקו אם לזנב יש טונוס

הזיזו את הזנב כלפי מעלה בעזרת האצבע. עכבר בריא ישמור על זנבו למעלה. אם EAE קליני החל, טונוס הזנב יהיה נמוך יותר על ידי ירידה הדרגתית של הזנב. בסופו של דבר, העכבר לא יוכל להרים את זנבו כלל.