קביעת הפרעה במחסום הדם-מוח באמצעות צבעים פלואורסצנטיים במודל עכבר EAE

התחל עם תמיסה המכילה צבע פלואורסצנטי ירוק הקשור לשרשרת דקסטרן גדולה. לאחר מכן, הוסף תמיסה של צבע אדום הקשור לשרשרת דקסטרן קטנה.

מערבבים היטב את הצבעים ולוקחים למזרק.

הזרקו את תערובת הצבע הזו לווריד לעכבר מורדם דרך הסינוס הרטרו-אורביטלי, וריד מאחורי העין.

עכבר זה סובל מדלקת מוח אוטואימונית ניסיונית או EAE.

במצב זה, מחסום הדם-מוח מופרע על ידי צמתים הדוקים מוחלשים בין תאי האנדותל של כלי הדם במוח עם רווחים.

אפשר לעכבר להתעורר לחלוטין ולהחזיר את התנועתיות, מה שמאפשר לצבעים להסתובב.

הצבע האדום עם שרשרת הדקסטרן הקטנה מתפזר בקלות דרך הרווחים הקטנים לתוך רקמת המוח, בעוד שהצבע הירוק הקשור לשרשרת הדקסטרן הגדולה מתפזר אם הנזק חמור.

הכמות של כל צבע פלואורסצנטי ברקמת המוח נמצאת בקורלציה עם מידת ההפרעה במחסום הדם-מוח.

להכנת תמיסות מלאי דקסטרן, ממיסים 10 מיליגרם של שלושה קילודלטון דקסטרן טקסס אדום ב-500 מיקרוליטר של תמיסת נתרן כלורי 0.9%, ו-5 מיליגרם של 10 קילודלטון דקסטרן AlexaFluor 488 ב-250 מיקרוליטר של תמיסת נתרן כלורי 0.9%.

עבור פתרון העבודה של דקסטרן, רגע לפני ההזרקה, פיפטה 55 מיקרוליטר של תמיסת מלאי Dextran AlexaFluor 488 של 10 קילודלטון על פיסת סרט איטום, ולאחר מכן, הוסף 55 מיקרוליטר של תמיסת מלאי Dextran Texas Red של שלושה קילודלטון. מערבבים ואוספים 100 מיקרוליטר למזרק עדין חד פעמי.

לאחר מכן, הניחו עכבר מורדם במצב רוחבי על השולחן. הזריק תוך ורידי 100 מיקרוליטר של עוקבים פלואורסצנטיים לעכבר לפני שהעכבר מתעורר. תן לעוקב להסתובב במשך 15 דקות.