הערכת השלמות המבנית של הצמתים העצביים-שריריים האורכיים הגביים בדרוזופילה

התחל עם בית החזה של דרוזופילה קבוע כימית וטרנסגני במאגר.

בבית החזה הטרנסגני, הצמתים העצביים-שריריים של שרירי האורך הגביים מכילים נוירונים המבטאים חלבון מוטנטי הגורם לניוון עצבי.

הסר את המאגר והקפיא את בית החזה כדי למנוע נזק לרקמות במהלך החצייה.

מוסיפים חיץ טרי ומעבירים את החזה לכלי חיתוך.

מקם את צד הגחון של בית החזה כלפי מעלה והסר את אשכולות תאי העצב כדי לחשוף את קו האמצע.

חצו לאורך קו האמצע כדי להשיג hemithoraces.

הסר רקמות עודפות.

דגרו את ההמיתוראסים במאגר חוסם כדי לחדור את הממברנות ולמנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים מצומדים פלואורופור המכוונים לגליקופרוטאין המתבטא בתאי עצב NMJ ובחוטי אקטין שרירים.

הסר נוגדנים לא קשורים.

מסדרים את ההמיטוראסים על מגלשת גשר, מוסיפים אמצעי הרכבה ומרכיבים את הרקמות.

דמיין תחת מיקרוסקופ.

בהשוואה לסוג הפראי, המוטאנטים מראים צביעה עצבית מופחתת, מה שמעיד על ניוון עצבי, בעוד שהשרירים מציגים פלואורסצנטיות שלמה.

לפני תחילת החצייה, לבשו כפפות מגן ומשקפי בטיחות ומלאו בקבוק דיואר בחנקן נוזלי. השתמש במפסק להב כדי לתפוס להב נוצה בזווית וכופף את הלהב כדי לשבור חתיכה קטנה. השתמש במפסק הלהב כדי לנעול את הלהב במקומו והשתמש בפיפטה מזכוכית פסטר כדי להסיר את כל ה-PBS מצינורות הדגימה.

השתמש בפינצטה קריוגנית כדי לטבול את הצינורות בבקבוק החנקן הנוזלי. לאחר 10