יצירת אורגנואידים עצביים דופמינרגיים מתאי גזע עובריים אנושיים

קחו תאי גזע עובריים אנושיים, או hESCs, בבקבוק מצופה מטריצה חוץ-תאית.

החלף את המדיום במדיום אינדוקציה עצבי ודגירה, תוך הבחנה בין hESCs למושבות תאי אב עצביים, או NPC.

הוסף תמיסה אנזימטית כדי לנתק את המושבות.

צנטריפוגה, הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש תאים במדיום אינדוקציה עם גורמי גדילה כדי לתמוך בהתמיינות NPC.

הוסף את תרחיף התא על מיקרו-בארות בצורת פירמידה הפוכה ליצירת נוירוספרות תלת מימדיות.

העבר נוירוספרות לצלחת מצופה מטריצה חוץ-תאית המכילה מדיום התמיינות עם גורמי גדילה ומולקולות קטנות. דגירה תחת תסיסה כדי לקדם התמיינות לנוירוני אב דופמינרגיים.

החלף את המדיום במדיום התבגרות עצבית והנח נוירוספרות על דיסק ממברנה בהכנסת באר תרבית, מה שמאפשר דיפוזיה של אוויר וחומרים מזינים.

דגירה בתנאים סטטיים ליצירת אורגנואידים תלת מימדיים המורכבים מנוירונים דופמינרגיים בוגרים.

אורגנואידים אלה, המחקים מוח מתפתח, שימושיים לחקר ניוון נוירונים דופמינרגיים, מאפיין של מחלת פרקינסון.

החלף את מדיום תאי הגזע המשמש לשמירה על תכונות פלוריפוטנטיות של hESCs, במדיום נטול סרום המכיל קוקטייל עיכוב SMAD כפול להתחלת אינדוקציה עצבית, ו-10 מעכבי ROCK מיקרו-מולאריים כדי להגדיל את שיעור ההישרדות של תאים במהלך המעבר למחרת. ביום הראשון, הכינו את צלחת המיקרו-באר עם 2.5 מיליליטר לבאר של מדיום נטול סרום המכיל את אותו ריכוז של מעכ