צביעה אימונופלואורסצנטית של סיאלוגליקופפרוטאינים בתאי אב עצביים ובתאי עצב

קחו לדוגמה תאי גזע עצביים ראשוניים ותאי אב ונוירונים, שיש להם סיאלוגליקופרוטאינים המתויגים על ידי מדווח חומצה סיאלית.

הוסף פרפורמלדהיד כדי לתקן את התאים. הסר עודפי פרפורמלדהיד באמצעות חיץ.

דגירה עם תערובת תגובה המכילה בדיקות כימיות מבוססות ביוטין, חומר הפחתה וזרז מבוסס מתכת.

חומר ההפחתה מפעיל את הזרז, ומקל על ביוטינילציה של סיאלוגליקופרוטאינים.

הסר את תערובת התגובה ושטוף עם חיץ. הוסף סטרפטווידין מצומד פלואורופור כדי לקשור את הסיאלוגליקופרוטאינים הביוטיניים.

הסר את הסטרפטווידין הלא קשור ושטוף עם חיץ. הוסף חלבונים וחומר ניקוי לא יוני כדי לחסום אתרים לא ספציפיים ולחלחל לתאים.

הסר את התמיסה הזו ודגר עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבונים תאיים ספציפיים.

הסר את הנוגדנים הלא קשורים.

דגירה עם נוגדנים משניים מתויגים פלואורופור וצבע פלואורסצנטי כדי לקשור נוגדנים ראשוניים הקשורים לחלבון ולתייג את הגרעינים.

הסר מולקולות לא קשורות. לשטוף עם חיץ.

באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, דמו את התאים כדי לדמיין את הסיאלוגליקופרוטאינים הפלואורסצנטיים והחלבונים התאיים.

ראשית, הסר את התוספות מלוחות הקוקולטורה, ושאף את מדיום התרבות מתחתית הבארות. לאחר מכן, שטפו את התאים העצביים פעם אחת עם PBS שחומם מראש. שאפו את ה-PBS מהבארות, והוסיפו 1 מיליליטר של פרפורמלדהיד מקורר מראש של 4% ב-PBS לכל באר.

תקן את התאים בט