הדמיה של פפטידים עמילואיד-בטא בפרוסות מוח קליפת המוח האנושית

קחו שקופית זכוכית המכילה פרוסה קליפת המוח של רקמת מוח שנאספה מחולה אלצהיימר. הרקמה מכילה משקעי עמילואיד-בטא בלתי מסיסים בתוך הפרנכימה ונימי המוח.

טבלו את השקופית באלכוהול מדולל כדי להסיר שומנים ומלחים.

שטפו עם אלכוהול מוחלט כדי לייבש את הרקמה, ולאחר מכן מרחו מקבע כדי לשמר את ארכיטקטורת הרקמות.

יבש את המגלשה בוואקום, והסר כל לחות.

טפל באדי חומצה פורמית בסביבה לחה כדי לפרק אגרגטים של עמילואיד-בטא לפפטידים מסיסים קטנים יותר.

באמצעות סורק אופטי, צור תמונות של התכונות המבניות של הרקמה כדי לפרש נתונים מספקטרומטריית המסה של ההדמיה.

מרססים תמיסת מטריצה על הדגימה.

בעזרת ספקטרומטר מסה, יש למרוח לייזר שהמטריצה סופגת כדי ליינן את הפפטידים. לאחר מכן גלאי מזהה אותם על סמך יחס המסה למטען שלהם.

לנתח את הנתונים כדי לייצר תמונות, לחשוף את התפלגות פפטידי העמילואיד-בטא בפרנכימה של הרקמה ובנימי המוח.

כדי לשטוף את חלקי הרקמות, טבלו את הדגימות ב-40 עד 100 מיליליטר של 70% אתנול בצנצנת מכתים מזכוכית למשך 30 שניות כדי להסיר שומנים אנדוגניים ומלחים אנאורגניים. שטפו את הדגימות באמצעות רצף הכביסה המפורט בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, יבש את הדגימות בוואקום למשך 30 דקות.

כעת, טפל בקטעי הרקמה באדי חומצה פורמית ליינון טוב יותר של חלבוני העמילואיד-בטא מרקמת המוח שלאחר המוות. לשם כך מכינים את התנור בחום של 60 מעלות צלז