אימונוסטיין של נוירונים שטופלו בצברי אלפא-סינוקלאין

התחל בתרבית נוירונים דבוקה המטופלת באגרגטים אלפא-סינוקלאין או אלפא-S, שהם גושים של חלבון מקופל בצורה לא נכונה.

גושים אלה מצטברים ליצירת תכלילים תוך-תאיים.

החלף את המדיה בתמיסת קיבוע כדי לשמור על שלמות התא.

הסר את תמיסת הקיבוע ושטוף עם חיץ.

לאחר מכן, הוסף חומר פעילי שטח כדי לחלחל את קרום התא.

הסר את חומר פעילי השטח ושטוף עם חיץ.

הציגו תמיסת חסימה למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

כעת, דגרו עם נוגדנים ראשוניים הנקשרים במיוחד לתכלילים של אלפא-S וחלבונים מבניים.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

דגירה עם נוגדנים משניים המסומנים בפלואורסצנט.

הסר נוגדנים לא קשורים.

הוסף כתם פלואורסצנטי כדי לסמן את הגרעין.

הסר את הכתם ושטוף עם חיץ.

בעזרת אמצעי הרכבה, הרכיב את הכיסוי עם נוירונים על שקופית.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, התבונן בתכלילי אלפא-S בעלי תווית חיסונית בתוך הנוירון.

כדי לבצע אימונופלואורסצנציה במכסה אדים כימי יש לתקן את הנוירונים עם 2% פרפורמלדהיד ב-PBS ותמיסת סוכרוז 5% למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר מבלי לרעוד. לאחר 15 דקות, הסר את תמיסת הקיבוע ושטוף לזמן קצר את הנוירונים עם PBS שלוש פעמים.

לאחר מכן, לחדור את הנוירונים עם 0.3% של פעילי שטח לא יוניים ב-PBS למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו לזמן קצר את תאי העצב עם PBS שלוש פעמים. דגרו על הנוירונים עם 3% FBS ב-PBS למשך