מודל במבחנה של פציעת מתיחה בתאי עצב פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

התחל עם צלחת מרובת בארות ללא תחתית המחוברת לקרום סיליקון. הממברנה מצופה בביופולימר כדי להקל על הידבקות התאים.

הכנס נוירונים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים, או hiPSCNs, תלויים בתווך לבארות. המדיום מתווסף עם מטריצה חוץ-תאית, או חלבוני ECM כדי לשפר את הידבקות התאים.

דגירה על הצלחת, ומאפשרת לתאים להיצמד לחלבוני ה-ECM ולביופולימר, ולקדם אינטראקציה אחידה עם פני הממברנה.

לאחר מכן, אבטח את הצלחת על הבמה של מכשיר פציעה.

באמצעות המכשיר, החל שקע על הממברנה כדי ליצור לחץ מכני מבוקר על הנוירונים.

הלחץ משבש את השלד הציטולוגי, מה שגורם לניוון של בליטות תאיות הנקראות נויריטים ולהיווצרות נפיחויות קטנות לאורך הנויריטים.

הלחץ פוגע גם בשלמות קרום התא, וכתוצאה מכך מוות של תאים.

ה-hiPSCNs המציגים פנוטיפ של פציעת מתיחה מוכנים כעת לניתוח.

כדי למתוח את הצלחת, שנה את "שם הקובץ" ואת השדה "נתיב קובץ" במכשיר הווירטואלי "מעקב אחר מיקום" לשם קובץ ייחודי ולחץ על חץ ההפעלה. הגדר את העומק ומשך הכניסה בשדות "פציעה" ו"משך פציעה" במכשיר הווירטואלי של לוח בקרת התנועה. כשהצלחת במצב אפס, הפעל את המכשיר הווירטואלי "לוח בקרת תנועה" ולחץ על פציעה כדי להכניס את הצלחת.

נקישה למעלה כדי להזיז את ה-stagה למעלה, לחץ על עצור כאשר הצלחת במצב העליון, ופתח את הדלת כדי לבטל את מכשיר הפציעה. לאחר מכן, בדוק את היסטוריית התזוזה של השלב המוצג במכשיר הווירטואלי "Position Tracker" כדי לאשר שהתזוזה המקסימלית שצוינה הוחלה, וייצא את הנתונים לתוכנית גיליון אלקטרוני מתאימה.

כדי להעריך את מתיחת קרום הסיליקון לאחר טיפול בפלזמה, הניחו את הצלחת על משטח רך והניחו את הבליטה הקטנה על חותמת עם דיו מעט טוש קבוע. הכנס את החותמת לבאר הראשונה שנבדקה, והקש כדי להבטיח העברה טובה של דיו. כאשר כל הבארות הוטבעו, הצב מצלמה מהירה על מעמד זרוע מעל מכשיר הפציעה, כאשר העדשה מכוונת לנקודת ה-F הממוספרת הקטנה ביותר כך ששדה הראייה מכיל 12 שקעים ברשת של 3 על 4.

כשהצלחת במצב נקודת האפס, לחיצה אחת על כפתור ההקלטה בתוכנת המצלמה כך שהיא תקרא "Trigger In" ותדליק את האור הצירי הבהיר והמפוזר, ואז הכנס את הצלחת כפי שהודגם זה עתה, וכבה את האור הצירי.

כדי לפגוע בתרבית תאים, הוסף 100 מיקרוליטר של נוירונים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שטופלו בלמינין לכל באר של הצלחת שטופלה בפלזמה, ואפשר לתאים להיצמד לתחתית הצלחת למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, לפני הנחת הצלחת באינקובטור תרבית התאים. לאחר 2 עד 3 ימים של תרבית, clamp את הצלחת על מכשיר הפציעה tagה והתאם את מיקום המכסה כדי לאבטח את הצלחת מבלי לחשוף את התרביות לאוויר הסביבה. לאחר מכן, כשהצלחת במצב נקודת האפס, הכנס את הצלחת כפי שהודגם זה עתה.