JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:26 דק' • July 8th, 2025
התחל בתמיסה של resiniferatoxin (RTX), אגוניסט בעל זיקה גבוהה של קולטן TRPV1 - תעלות יונים רגישות לכאב המתבטאות בנוירונים חושיים.
קח עכבר מבוגר מורדם ונהל RTX תוך צפק.
התרופה נכנסת למחזור הדם המערכתי ומגיעה לגרעיני השורש הגבי (DRG), מקבץ של גופי תאי עצב חושיים הממוקמים בסמוך לחוט השדרה.
RTX חוצה את מחסום הדם-עצב ומקיים אינטראקציה עם נוירונים חושיים בקוטר קטן ב-DRG המבטאים בשפע את TRPV1.
קשירת RTX ל-TRPV1 מפעילה את הקולטנים, וגורמת לזרם יוני סידן מסיבי לתוך הנוירונים.
סידן תוך-תאי מפעיל אנזימים שמפרקים פוספוליפידים בקרום התא, חלבונים תאיים ו-DNA, מה שמוביל בסופו של דבר למוות עצבי.
לאחר מכן, סיבי העצב התוך-אפידרמיסיים (IENFs), המסופים ההיקפיים של נוירונים חושיים בקוטר קטן המעצבבים את העור, מתחילים להתנוון.
ניוון זה של IENFs גורם לאובדן קלט חושי מהעור, ובכך יוצר מודל נוירופתיה של סיבים קטנים.
כדי להתחיל, לבש ציוד מגן אישי ונקוט באמצעי זהירות נאותים בעת הכנת תמיסת השרף או RTX. יש לדלל כמות אחת של 600 מיקרוליטר במי מלח לצורך הניסוי, ולחלק את השאר לכמות של 12 מיקרוליטר לאחסון. עבור עכברי בדיקה, השתמש בעכברי ICR זכרים בוגרים בני שמונה שבועות, במשקל שבין 35 ל-40 גרם. יש לתת מנה אחת של תמיסת RTX תוך צפקית עם מזרק מיקרו-הזרקה. לאחר מכן, הזריק קבוצה שנייה של עכברים עם נפח שווה של רכב כדי לשמש כבקרה. לאחר ביצוע כל הזריקות, הכניסו את העכברים לכלובים הביתיים שלהם, וודאו שיש להם גישה אד-ליב למזון ומים.