אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:47 דק׳ • July 8th, 2025
מלאו נימי הזרקת זכוכית בתמיסה של פפטידים עמילואידים מונומריים סינתטיים, שהם פפטידים חריגים בעלי תכונות מועדות לצבירה.
הכנס את הנימים למחזיק מיקרו-הזרקה.
במקביל מניחים דג זברה בצלחת פטרי המכילה תמיסת הרדמה.
לאחר שהדג מורדם, החזק אותו לרוחב בעזרת מלקחיים כדי לאבטח את הראש.
בצע חתך קטן בגולגולת הדג בצומת של שתי הלוחות הצדדיים כדי לגשת למוח הקדמי העשיר בתאי עצב.
כעת, הכניסו את המחט הנימים דרך החתך, והזריקו את תמיסת פפטיד העמילואיד למוח הקדמי.
העבירו את דג הזברה למיכל התאוששות עם מים במחזור.
בתוך המוח הקדמי, פפטידי העמילואיד מצטברים ליד הנוירונים.
פפטידים אלה מתקפלים באופן ספונטני ליצירת יריעות בטא ומצטברים סביב הנוירונים ליצירת פלאק עמילואיד רעיל.
הפלאקים האלה פוגעים בתאי העצב ופוגעים בהעברת האותות שלהם.
זה מבסס מודל דג זברה של מחלת אלצהיימר, הפרעה מוחית המאופיינת בפלאק עמילואיד.
השתמש במושך מחט עם פרמטרים המתוארים בפרוטוקול הטקסט, כדי להכין נימי הזרקת זכוכית. כוונן את הגדרת הלחץ על מקור הלחץ ל-25 PSI. לאחר מכן, במזרק המיקרו הגדר את לחץ האחיזה ל-20 PSI, את לחץ הפליטה ל-10 PSI, את ערך התקופה ל-2.5 ואת ערך השער ל-100 אלפיות השנייה. לאחר מכן, טען את נימי הזכוכית בתמיסת ההזרקה.
לאחר מכן, הכנס את נימי הזכוכית למחזיק הזרקת המיקרו, והתאם את זווית ההזרקה ל-45 מעלות. מניחים דג אחד בצלחת פטרי חדשה מלאה בתמיסת הרדמה. לאחר ההרדמה, החזיקו את הדג במלקחיים וכוונו אותו להזרקה. בעזרת קצה מחט בקוטר 30, צור חריץ בגולגולת מעל הטקטום האופטי שבו נפגשות שתי הלוחות הרוחביים. השתמש רק בקצה המחט, ואל תחדור יותר ממילימטר אחד דרך הגולגולת.
לאחר מכן, תוך כדי המשך החזקת הדג, הכנס את קצה נימי הזכוכית דרך אתר החתך. כוון את קצה נימי הזכוכית לכיוון הטלנצפלון בזווית של 45 מעלות, ולאחר מכן הזריק 1 מיקרוליטר מהתמיסה. מחזירים את הדג למיכל הובלה עד שהוא מתאושש. לאחר מכן, התחבר למיכל למי הדגים המסתובבים באופן קבוע כדי להבטיח איכות מים אופטימלית.