אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:05 דק׳ • July 8th, 2025
נתחיל עם עכבר מורדם עם גולגולת חשופה. העכבר מאובטח במסגרת סטריאוטקסית המכילה מזרק מלא מראש בחלבוני עמילואיד-בטא המועדים לצבירה.
סמן את הברגמה, נקודת ייחוס מרכזית לקביעת קואורדינטות עירוי חלבון.
הזיזו את המזרק, וגעו בברגמה, ואז בלמבדה, כדי לקבוע את הקואורדינטות הגביות-גחוניות, תוך הבטחת עומק מחט מדויק.
מקם מחדש את המזרק מעל הקואורדינטה המדיאלית-צדדית שנקבעה מראש, תוך התמקדות בפיתול המשונן, החיוני לעיבוד זיכרון.
גע במשטח הגולגולת, וודא שהקואורדינטה הגבית-גחונית נמצאת בגבול, וסמן אותה. חזור על הליך זה בצד הנגדי.
קדחו בקואורדינטה המדיאלית-רוחבית המסומנת, הזריקו את חלבוני העמילואיד-בטא לתוך הבליטה המשוננת והחזיקו כדי למנוע זרימה חוזרת.
קדחו והזריקו חלבוני עמילואיד-בטא בצד הנגדי לפיזור חלבון אחיד.
נתק את מוטות האוזניים מהעכבר, ואז תפר את החתך.
עם הזמן, חלבוני עמילואיד-בטא מצטברים ליצירת פלאקים המפרקים את נוירוני הפיתול המשוננים ומשבשים את עיבוד הזיכרון, וכתוצאה מכך מחלת אלצהיימר.
בצע חתך של 2 עד 3 מילימטר בקו האמצע של הקרקפת בעזרת אזמל. השתמש במספריים עדינים ישרים כדי להאריך את קו החתך לכ-1.0 סנטימטרים כדי לחשוף את התפר הסגיטלי, הברגמה והלמבדה של הגולגולת. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי לפרק את העור.
נקו את הגולגולת בעזרת צמר גפן סטרילי ספוג במי מלח סטריליים. לאחר מכן השתמש בצמר גפן נקי ויבש כדי לייבש את הגולגולת. לאחר מכן, סמן נקודה על הברגמה. מקם את מזרק המילטון באמצעות המיקרומניפולטור כך שקצה המחט פשוט ייגע בנקודה שעל הברגמה. לאחר מכן, רשום את קואורדינטת ה- DV.
סמן נקודה על נקודת הלמבדה. ודא שציר ה-AP של הגולגולת מפולס על ידי הזזת המזרק לאחור לנקודת הלמבדה. קצה המחט צריך לגעת בנקודת הלמבדה כפי שנגע בנקודת הברגמה. לאחר מכן, רשום את מיקום ה- DV. קואורדינטות ה-DV עבור ברגמה ולמבדה צריכות להיות בטווח של 0.5 מילימטרים.
כעת, החזר את קצה המחט לנקודת הברגמה. רשום את מיקום ה-AP ההתחלתי. לאחר מכן, חשב את מיקום ה-AP הסופי על ידי הפחתת 2 מילימטרים מקואורדינטת ה-AP ההתחלתית, ומקם מחדש את מחט המזרק לקואורדינטת ה-AP הסופית.
לאחר מכן, רשום את קואורדינטת ה-ML הנוכחית. חשב את קואורדינטות ה-ML השמאליות והימניות על ידי הוספה או חיסור של 1.3 מילימטרים מקואורדינטת ה-ML ההתחלתית, והעבר את מחט המזרק לקואורדינטות ה-ML הסופיות. גע בקצה המחט על פני הגולגולת בשתי קואורדינטות ה-ML הסופיות, וודא שקואורדינטות ה-DV נמצאות בטווח של 0.5 מילימטרים.
בעודו בקואורדינטת ML הסופית, משוך את המחט למעלה 0.5 עד 1 סנטימטר מעל הגולגולת. סמן נקודה על הגולגולת עם טוש בצבע כהה במיוחד עדין. חזור על שלב זה עבור הצד הנגדי של הגולגולת. לאחר מכן, הרחיקו את המזרק.
קדחו חור בקואורדינטות ה-ML השמאלית או הימנית על הגולגולת באמצעות מקדחה של 0.8 מילימטר. חזור על שלב זה עבור הצד הנגדי. לאחר מכן, העבר את המזרק לאחד החורים החדשים שהוצגו. הורידו את המחט עד מעבר לגולגולת, והיזהרו לא לנקב את המוח.
כדי להבטיח שהמחט עברה את הגולגולת, דחף בעדינות את המחט אל הגולגולת כדי לוודא שהמחט לא יוצאת מהחור. לאחר מכן, רשום את קואורדינטת ה-DV ההתחלתית. חשב את קואורדינטת ה-DV הסופית על ידי הפחתת 2.2 מילימטרים מקואורדינטת ה-DV ההתחלתית, והורד את המחט לקואורדינטת ה-DV הסופית.
לאחר מכן, הגדר את משאבת המזרק הסטריאוטקסית להחדיר 4 מיקרוליטר של Aβ1-42 לתוך הבליטה המשוננת בקצב של 0.5 מיקרוליטר לדקה. לאחר העירוי, הניחו למחט להישאר במקומה למשך דקה נוספת כדי למזער את הזרימה החוזרת של התמיסה מאתר ההזרקה. לאחר מכן, הזיזו את המחט לצד השני של המוח וחזרו על ההליך.
כעת, פתח את מוטות האוזניים. השתמש במלקחיים סטנדרטיים של תלמידים כדי לסגור את הקרקפת ולאטום את הפצע בתפר. הסר את מגן האף והסר את העכבר.