הדמיה בהילוך מהיר לניטור ההתפשטות הטרנסתאית של חלבונים דמויי פריונים בנמטודות טרנסגניות

קח נמטודות טרנסגניות שנשמרות באותו שלב התפתחותי.

תאי שריר דופן הגוף של נמטודות אלה מבטאים חלבונים דמויי פריון, המתויגים בחלבון פלואורסצנטי אדום וממוקמים בתוך שלפוחיות חומציות.

חלבונים דמויי פריון מקופלים בצורה שגויה, וצוברים חלבונים הקשורים למחלות ניווניות.

לאחר מכן, העבירו את הנמטודות למשטח אגרוז המכיל ננו-חלקיקים פולימריים ותמיסת הרדמה.

ההשפעות המשולבות של הננו-חלקיקים ותמיסת ההרדמה משתקות את הנמטודות על כרית האגרוז.

הניחו כיסוי על כרית האגרוז ואטמו אותה.

כעת, מקם את מכלול כרית האגרוז עם הנמטודות תחת מיקרוסקופ קונפוקלי והגדר את פרמטרי ההדמיה המתאימים.

רכוש תמונות זמן-lapse של החלבונים המתויגים פלואורסצנטיים בתוך הנמטודות כדי לנטר את ההובלה השלפוחית של החלבונים דמויי הפריון בתוך ובין תאי השריר של דופן הגוף.

לאחר הכנת קווים טרנסגניים מסונכרנים של C. elegans ותחום פריון, ו-10% רפידות אגרוז על פי פרוטוקול הטקסט הנלווה, פיפטה 3 מיקרוליטר של 100 ננוגרם חרוזי פוליסטירן ו-3 מיקרוליטר של 4 מילי-מולרי לבאמיסול לתוך כרית האגרוז. בעזרת קיסם תיל פלטינה, העבירו תולעים בגיל הרצוי מצלחת לתמיסה, והשתמשו בכיסוי לכיסוי.

כדי לצלם את התולעים ברמה התת-תאית, הנח את השקופית לתוך מחזיק שקופיות המיקרוסקופ של מיקרוסקופ קונפוקלי, והשתמש במטרת שמן 63X או 100X/ 1.4 NA. לאחר מכן, פתח את MetaMorph ובחר "רכישה ר