הזרקה וקטורית ויראלית לתוך חומר החולדה ניגרה למידול מחלות נוירודגנרטיביות

אבטח חולדה מורדמת במסגרת סטריאוטקטית.

חיטוי הקרקפת וביצוע חתך בקו האמצע של הגולגולת כדי לחשוף את הגולגולת.

זהה את הברגמה והלמבדה, שתי נקודות ייחוס על הגולגולת, כדי לקבוע את מקום ההזרקה.

הכן מזרק מיקרו-הזרקה המכיל תרחיף וקטור ויראלי.

הווקטור הנגיפי נושא טרנסגן המקודד אלפא-סינוקלאין, חלבון שעובר קיפול שגוי וצבירה בתאי העצב של החומר השחור במחלות ניווניות.

מקם את המזרק במכשיר הסטריאוטקסי המחובר למשאבת מיקרו-הזרקה.

צור חור בור באתר ההזרקה, והימנע מפגיעה מוחית.

חודרים לדורה בעזרת מחט ומנקים כל דם ברקמה סטרילית.

הכנס את מחט המיקרו-הזרקה דרך חור הבור כדי להגיע לחומר השחור.

הזרקו לאט את התרחיף הנגיפי, והבטיחו פיזור אחיד.

עצור לזמן קצר כדי למנוע זרימה חוזרת, ואז משוך לאט את המחט.

לתפור את החתך.

המודל מוכן כעת לניתוח נוסף.

התחילו בהרדמה נכונה של נקבת חולדת וויסטאר בת שמונה שבועות על פי פרוטוקולים מאושרים. בדוק שהושגה תוכנית כירורגית של הרדמה על ידי לחיצה על כל כפה וציון היעדר רפלקס הנסיגה. לאחר מכן, השתמש במשתיל מיקרו-טרנספונדר כדי למקם מיקרו-טרנספונדר על גב החולדה. בדוק שהמיקרו-טרנספונדר ממוקם כהלכה, ושניתן לקבל קריאה.

כעת גזרו את השיער על קרקפת החולדה ומרחו חומר הרדמה מקומי על הקרקפת והאוזניים. העבירו את החולדה למכסה זרימה למינרית, ובצעו את שאר ההליך בטכניקה אספטית. הנח את החולדה במסגרת הסטריאוטקסית על ידי אבטחת מוטות האוזניים, ואחריהם מוט הפה והאף. כסו את גוף החולדה בשמיכת נייר כדי למנוע ירידה בטמפרטורת הגוף. יש למרוח חומר סיכה לעיניים כדי למנוע התייבשות של העיניים.

לאחר מכן, יש לחטא את הקרקפת על פי נהלים מאושרים. משתמשים כאן ב-1% יוד ב-70% איזופרופנול. לאחר ביצוע חתך קטן בקו האמצע של הקרקפת, יש לגרד בעדינות את הקרומים שעל הגולגולת ולשטוף במי מלח. לאחר שאפשרתם לגולגולת להתייבש, וודאו שניתן לראות בבירור ברגמה ולמבדה.

כעת, מלאו מזרק מיקרו-הזרקה בנפח 10 מיקרוליטר ו-20 מילימטר ב-AAV רקומביננטי, והניחו אותו על משאבת המיקרו-הזרקה הממונעת המחוברת למכשיר הסטריאוטקסי.

עבור התמרה ספציפית של הנוירונים הדופמינרגיים של החומר השחור, וקטורי AAV רקומביננטיים הם הבחירה הראשונה בגלל הטיטר הגבוה שלהם ויעילותם להתמרת נוירונים דופמינרגיים.

בדוק את הזרימה על ידי שחרור טיפת AAV. השלך כל AAV ששוחרר בחומר ניקוי רב ערכי. בדוק ויזואלית שהראש מקובע ישר במסגרת הראש. לאחר מכן בדוק שהגולגולת שטוחה על ידי הזזת קצה המחט לברגמה, ומדידת הגובה בנקודה זו על ידי הורדת קצה המחט בכיוון הגב-וונטרלי, עד שהיא נוגעת בגולגולת. חזור על ההליך בלמבדה.

לאחר החזרת המחט לברגמה, הזיזו את המחט בכיוון האנטרופוסטריורי והמדיולטרלי לקואורדינטות הסטריאוטקסיות למיקרו-הזרקה. רשום את הקואורדינטות. במקום ההזרקה יש למדוד את גובה הגולגולת כמו קודם, ולוודא שהוא אינו שונה יותר מ-0.3 מילימטרים מגובה הברגמה.

ואז לקדוח בזהירות חור של 2 מילימטר בגולגולת. לאחר קידוח החור, מדוד את גובה הדורה כדי לקבוע את הייחוס שממנו יש ליישם את הקואורדינטה האחורית. חודרים לדורה באמצעות מחט בגודל 26. ספוג כל דם עם רקמה סטרילית, והמשך רק לאחר הפסקת כל הדימום.

כעת הורד לאט לאט את המחט של מזרק המיקרו-הזרקה הטעון מראש לתוך המוח לקואורדינטת הגחון הגבית, ועצור למשך דקה. לאחר מכן הזרקו שלושה מיקרוליטר של AAV בקצב של 0.25 מיקרוליטר לדקה. לאחר ההזרקה, הניחו למחט להישאר במקומה למשך חמש דקות נוספות כדי למנוע זרימה חוזרת לאורך מסלול המחט לפני הסרתה לאט.

תפר את הקרקפת באמצעות פוליאסטר קלוע מצופה 3.0, וחטא את העור עם 1% יוד ב-70% איזופרופנול, כדי לשחרר את האף ואת מוט הפה, ולאחר מכן את שני מוטות האוזניים כדי להסיר בעדינות את החיה מהמכשיר הסטריאוטקטי. בשלב זה, יש לתת משככי כאבים, ובמידת הצורך חומר היפוך הרדמה. לאחר מכן, הניחו את החולדה בכלוב נקי על צלחת חימום המוגדרת ל-38 מעלות צלזיוס ועקבו מקרוב עד שהיא מתעוררת.