הערכת התיישבות חיידקים במוח עכבר בעקבות זיהום ליסטריה מונוציטוגנים

קח מוח עכבר מפוצץ במאגר.

המוח נגוע בליסטריה מונוציטוגנס עמידה לסטרפטומיצין, חיידק פתוגני.

שלב הזלוף מסיר דם מהמוח, ומבטיח שמדידות העומס החיידקי משקפות את העומס של ליסטריה מונוציטוגנס ברקמה.

לאחר מכן, הומוגניזציה של המוח באמצעות הומוגנייזר מעוקר כדי לפרק את הרקמה ולשחרר חיידקים.

כעת, הכינו דילולים סדרתיים של המוח הומוגנטי באמצעות בופר.

צלחו את הדילולים הללו על צלחות אגר עירוי לב מוח המכילות סטרפטומיצין, אנטיביוטיקה.

דגרו את הצלחות. אגר עירוי לב המוח מספק חומרים מזינים לצמיחת ליסטריה מונוציטוגנס, בעוד שסטרפטומיצין בוחר חיידקים עמידים, ומאפשר רק להיווצר מושבות ליסטריה עמידות לסטרפטומיצין.

ספרו את מספר המושבות בצלחת כדי לקבוע את היחידות היוצרות מושבה, מדד לעומס חיידקי זיהומי בר-קיימא במוח.

בעזרת מלקחיים, פתחו את הגולגולת כדי לחשוף את המוח והניחו מרית בין החלק התחתון של המוח לבסיס הגולגולת כדי להעביר בזהירות את המוח לתוך צינור של 15 מיליליטר המכיל 5 מיליליטר של 4 מעלות צלזיוס PBS.

בארון בטיחות ביולוגית, הכנס את הקצה והפעל הומוגנייזר רקמות למשך 10 שניות ברצף של 5% אקונומיקה, מים סטריליים, 75% אתנול ותמיסות מים סטריליות בצינורות חרוטיים נפרדים של 15 מיליליטר. כאשר הקצה עוקר ביסודיות, הומוגניזציה של המוח הנגוע בצינור שלו.

הכן דילולים סדרתיים פי עשרה של כל איבר הומוגני ב-PBS סטרילי וצלחת את הדילולים על צלחות אגר עירוי לב מוח. לאחר מכן, דגרו על תרביות הדילול ההומוגנטיות ב-37 מעלות צלזיוס למשך הלילה, וספרו את מספר המושבות בכל צלחת כדי לקבוע את המספר הכולל של חיידקים לכל איבר או מיליליטר דם.