אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:58 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מחסום דם-מוח במבחנה או מודל BBB.
מודל זה מורכב מתאי אנדותל המודבקים לצד העליון או הדם ואסטרוציטים בצד התחתון או המוחי של תוספת ממברנה מצופה מטריצה.
הוסף פלואורסצאין איזותיוציאנט או FITC, צבע פלואורסצנטי, לתא העליון של באר בקרה.
לעומת זאת, הוסף פריטין טעון FITC, או FITC-פריטין, לתא העליון של באר דגימה ולאחר מכן דגירה.
בבאר הבקרה, FITC חופשי נשאר מוגבל לתא העליון, עם מעבר מינימלי דרך ה-BBB.
בינתיים, בבאר הדגימה, קומפלקסים של FITC-פריטין נקשרים לקולטנים בתאי האנדותל.
זה מאפשר הפנמה והובלה בתיווך קולטנים לתוך החדר התחתון.
לאחר מכן, אספו באופן קבוע מדיום מהחדרים התחתונים של שתי הבארות ומדדו את עוצמת הקרינה.
הבקרה מציגה פלואורסצנטיות נמוכה יותר, בעוד שהדגימה מציגה פלואורסצנטיות גבוהה יותר, המאשרת את חדירות ה-BBB הדיפרנציאלית עבור FITC ו-FITC-פריטין.
כדי למדוד את שטף ה-FITC-פריטין דרך מערכת מחסום הדם-מוח, הוסף פריטין טעון FITC או FITC חופשי לחלק העליון של לפחות שלוש מערכות מחסום דם-מוח עבור כל פורמולה.
לאחר שבע שעות בחממה, משוך 2 מיליליטר מדיום מהתאים התחתונים של שלוש תוספות דגימה ובקרה. מדוד את עוצמת הקרינה של 500 מיקרוליטר מהדגימות שנאספו על ידי ספקטרופלואורומטר, וקבע את ריכוז ה-FITC או ה-FITC-פריטין המחלחלים בהתאם להוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול.