אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 1:59 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם גור עכבר מהונדס גנטית הנושא את הגן CCM2, החיוני ליציבות כלי הדם.
גן זה מוקף בשני אתרי loxP. תאי האנדותל של הגור מבטאים גם אנזים Cre recombinase המאוחה לקולטן אסטרוגן או ER.
הזריק תוך קיבה 4-הידרוקסיטאמוקסיפן או 4-HT לגור.
ה-4-HT מתפזר דרך תאי אנדותל ונקשר לחלק קולטן האסטרוגן של חלבון ההיתוך Cre-ER.
קשירה זו מעוררת שינוי קונפורמציה המפעיל Cre recombinase, שנכנס לגרעין תאי האנדותל ונקשר לאתרי ה-loxP.
זה מקל על אירוע הרקומבינציה בין אתרי ה-loxP, יוצר לולאה ומסיר את מקטע הגן CCM2.
אובדן CCM2 משבש את שלמות תאי האנדותל, ומסכן את יציבות דפנות כלי הדם.
זה מוביל להתפתחות של מבני כלי דם לא תקינים נפוחים המכונים מומים במערות מוחיות או CCM, שהם שבירים ונוטים לדליפה.
התחל בהמסת 4-HT ב-100% אתנול לריכוז של 10 מיליגרם למיליליטר. הכינו 30 מיקרוליטר אליקוטים ואז אחסנו במינוס 80 צלזיוס. ביום השימוש, יש לדלל את ה-4-HT המצוטט בשמן תירס ל-0.5 מיליגרם למיליליטר. לאחר מכן, השתמש במזרק אינסולין כדי להזריק תוך קיבה 50 מיקרוליטר של 4-HT לגורי יילודים P1 כדי לגרום לנגעי CCM ניסיוניים.