אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:04 דק׳ • July 8th, 2025
התחילו עם שקופית המכילה קטע דק של אורגנואיד קליפת המוח המכיל תאי גליה ונוירונים בשלבים שונים של הזדקנות.
הנוירונים המזדקנים, במצב של הזדקנות עם ירידה בתפקוד התאים, מכילים רמות גבוהות של בטא-גלקטוזידאז.
הקטע מטופל מראש עם מקבע לייצוב מבנה התא וחומר מחלחל לחדירת הממברנות שלהם.
הנח את השקופית במיכל מכתים לשטיפה עם מאגר כדי להסיר עקבות תמיסה.
צבעו את השקופית בתמיסה המכילה מצע לאנזים בטא-גלקטוזידאז ודגרו.
המצע נכנס לתאים, שם בטא-גלקטוזידאז מבקע את המצע, ומייצר תוצר בצבע כחול שמצטבר יותר בתאי העצב המזדקנים.
שטפו שוב ושוב את הקטע.
הוסף תושבת נגד דהייה ואפשר לו להתמצק, מה שמבטיח את שלמות החלק המוכתם.
התבוננו בשקופית תחת מיקרוסקופ; האזור עם תוצר בצבע כחול עז מציין את הנוירונים המזדקנים בתוך האורגנואיד.
לאחר הקפאת האורגנואידים, הסר את תמיסת ההרכבה העודפת על ידי העברת השקופיות למיכל עומד עם מכסה, ושטוף את רקמת האורגנואיד החתוכה שלוש פעמים עם PBS למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, דגרו את המגלשות למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם תמיסת צביעה בטא-גלקטוזידאז טרייה. שטפו את הרקמות המוכתמות שלוש פעמים עם PBS למשך 10 דקות כל אחת בטמפרטורת החדר כדי להסיר את תמיסת הבטא-גלקטוזידאז.
כעת, הרכיבו את הרקמות השטופות עם תושבת זכוכית נגד דהייה ואפשרו לתמיסת ההרכבה להתמצק למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר לפני שתצפו בה תחת המיקרוסקופ.