צביעה אימונוהיסטוכימית של חלבון S-100 בקטעי ביופסיית יניקה רקטלית אנושית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:02 דק׳ • July 8th, 2025
קח קטעי ביופסיה קבועים של יניקה רקטלית אנושית עם אנטיגנים חלבונים חשופים ופרוקסידאזות אנדוגניות מומתות.
הוסף תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
החלף את תמיסת החסימה בנוגדנים ראשוניים הנקשרים לחלבון תאי גליה המטרה, S-100, סמן למחלת הירשפרונג.
הסר נוגדנים לא קשורים ודגר עם פולימרים פרוקסידאז כדי להגביר את האות.
שוטפים כדי להסיר עודפי פולימר. הוסף נוגדנים משניים הנקשרים לפולימרים אנזימים ונוגדנים ראשוניים.
הסר נוגדנים לא קשורים והוסף מצע כרומוגני.
הפרוקסידאזות מגיבות עם המצע ויוצרות משקעים צבעוניים.
יש לשטוף כדי להסיר עודפי משקעים.
הוסף צבע כדי להכתים את הגרעינים.
שוטפים בתמיסת חומצה-אתנול להסרת עודפי צבע.
לאחר מכן, יבש את החלקים באמצעות ריכוזים הולכים וגדלים של אתנול ואחריו קסילן.
לבסוף, הרכיבו והתבוננו תחת מיקרוסקופ כדי לדמיין את הצביעה המצביעה על נוכחות חלבון המטרה.
השליכו את עודפי האלבומין בסרום בקר, וסמנו את התאים ב-50 מיקרוליטר של הנוגדן העיקרי המעניין ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת בבוקר, שטפו את השקופיות בשלוש שטיפות של שלוש דקות ב-PBS והוסיפו 50 מיקרוליטר של משפר פולימר לכל שקופית. לאחר 20 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, שטפו את השקופיות שלוש פעמים ב-PBS, והוסיפו 50 מיקרוליטר של נוגדן B משני לכל קטע רקמה.
לאחר 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס, שטפו את החלק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים