JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 3:10 דק' • July 8th, 2025
קחו פרוסה קליפת המוח ממוח עכבר טרנסגני המבטא תעלות קטיון המופעלות על ידי אור בנוירונים פירמידליים מעוררים של קליפת המוח.
אבטח את הפרוסה בתא הקלטה והחדיר אותה בנוזל מוחי מלאכותי כדי לשמור על כדאיות הרקמות.
הכנס אלקטרודת הקלטה לשכבת קליפת המוח השטחית ורשום את הפעילות העצבית הבסיסית.
הציגו תרופה הגורמת להתקפים החוסמת תעלות אשלגן מגודרות מתח, מונעת יציאת אשלגן ושומרת על הנוירונים במצב של ריגוש יתר.
הנוירונים ההיפר-מעוררים מייצרים באופן ספונטני התפרצויות של פוטנציאל פעולה, המכונים אירועי איקטל, למשך זמן ממושך.
כדי ליצור אירועי ictal לפי דרישה, הפעל דופק אור קצר כדי להפעיל את תעלות הקטיונים על הנוירונים הפירמידליים המעוררים.
זרם הקטיונים שנוצר מייצר פוטנציאל פעולה, ומפעיל שחרור של נוירוטרנסמיטורים מעוררים.
נוירוטרנסמיטורים אלה נקשרים לקולטנים על נוירונים פוסט-סינפטיים, וגורמים לזרם של קטיונים.
הזרם מביא להתפרצויות של פוטנציאל פעולה, היוצר אירועים איקטליים למשך זמן קצר.
בהליך זה, גזרו נייר עדשה שהוא מעט גדול יותר מפרוסת המוח. השתמש בפיפטה רחבה או במברשת פירוט כדי להעביר פרוסת מוח על נייר העדשה החתוך המוחזק במקומו באמצעות פינצטה דנטלית. לאחר מכן, העבירו את נייר העדשה עם פרוסת מוח לתא ההקלטה ואבטחו אותו במקומו באמצעות מסך נבל.
לאחר מכן, יש לחלחל את פרוסת המוח בתא ההקלטה עם ACSF קרבוגן ב-35 מעלות צלזיוס, בקצב של שלושה מיליליטר לדקה. השתמש במדחום דיגיטלי כדי להבטיח שתא ההקלטה הוא 33 עד 36 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, מלאו מחדש את אלקטרודות הזכוכית ב-10 מיקרוליטר ACSF, באמצעות מזרק המילטון.
תחת הסטריאומיקרוסקופ פי 20, הנח את אלקטרודת הזכוכית המקליטה לשכבת קליפת המוח השטחית 2/3, באמצעות מניפולטורים ידניים. צפו בפעילות החשמלית של פרוסת המוח באמצעות תוכנה סטנדרטית. כדי לגרום לפעילויות דמויות התקף אלקטרוגרפי, יש לחלחל את פרוסת המוח עם ACSF המכיל 4-AP ב-100 מיקרומולר. צפו בפעילות החשמלית של פרוסת המוח באמצעות תוכנה סטנדרטית.
כדי ליצור אירועים דמויי התקפים אלקטרוגרפיים באמצעות אסטרטגיה אופטוגנטית על פרוסות המוח מעכברים אופטוגנטיים, השתמש במניפולטור ידני כדי למקם סיב אופטי בקוטר ליבה של 1,000 מיקרון ישירות מעל אזור ההקלטה. הפעילו פעימה קצרה של אור כחול כדי ליזום אירוע איקטלי.