גרימת פגיעה עצבית ממוקדת באמצעות לייזר בעל עוצמה גבוהה בזחל דרוזופילה

הניחו זחל דרוזופילה מורדם עם ראשו כלפי מעלה על טיפת שמן על שקופית זכוכית המכילה כתמי שומן ואקום.

מקם כיסוי ולחץ עליו בעדינות כדי ליצור מגע עם הזחל.

התאם את הזחל כדי לחשוף את האזור המכיל את נוירוני המטרה המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים.

אבטח את השקופית במיקרוסקופ בעל שני פוטונים.

השתמש בלייזר בעל הספק נמוך כדי למזער נזק וסרוק את הזחל כדי לאתר את האזור עם נוירוני המטרה הפלואורסצנטיים.

לאחר מכן, התאימו את חלון הסריקה כך שיתמקד באזור המטרה שמכיל אקסונים, סוג של הקרנות עצביות.

כעת, צמצם את קצב הסריקה והגדל את עוצמת הלייזר.

הלייזר בעל העוצמה הגבוהה יפגע באקסונים הממוקדים, ייצור חום מקומי הפוגע בהם ומשפר את הקרינה סביב אתר הפגיעה.

לבסוף, חזור למצב לייזר בעל הספק נמוך. נוכחותם של מכתש קטן, מבנים דמויי טבעת באתר הפגיעה מאשרת פגיעה עצבית מוצלחת.

התחל בהרדמת הזחלים. במכסה אדים, הניחו צלחת זכוכית בגודל 60 מילימטר לתוך צלחת פטרי מפלסטיק בגודל 15 סנטימטר. לאחר מכן, קפלו פיסת נייר טישו והניחו אותה בכלי הזכוכית. מניחים את צלחת אגר הענבים על הרקמה לאחר הוספת אתר הדיאתיל. לאחר מכן, על מגלשת זכוכית, הניחו טיפה אחת של שמן הלופחמן 27 במרכז, והניחו נקודה של שומן ואקום על כל אחת מארבע הפינות.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להעביר זחל אחד לצלחת האגר, וכסה את צלחת הזכוכית כדי להרדים את הזחל. ברגע שהזחל מפסיק לנוע, העבירו אותו בזהירות לשמן הלוקרבון כשראשו זקוף. לאחר מכן, הניחו כיסוי מעל המגלשה, ולחצו אותה בעדינות כלפי מטה, עד שהיא נוגעת בזחל. לאחר מכן, השתמש בכוח עדין כדי להחליק את הכיסוי כדי לגלגל את התאים לכריתת התאים למקום שבו שני לייזר הפוטונים יפגע בהם בצורה הקלה ביותר. המיקום ישתנה בהתאם לתאי העצב הממוקדים.

כעת, אבטח את ההרכבה בשלב מיקרוסקופ שני הפוטונים, והתמקד בתאים המעניינים באמצעות יעד טבילת שמן פי 40. בתוכנה, עבור למצב הסריקה וטען את הפרוטוקול השמור. ודא שהחור נפתח עד הסוף. לאחר מכן, במצב Live, קבל תמונה טובה של אזור העניין. לאחר מכן, הפסק את הסריקה החיה, כך שכפתור החיתוך יהפוך לזמין. באמצעות פונקציית החיתוך, כוונן את חלון הסריקה כדי למקד את אזור היעד רק באתר הפציעה הפוטנציאלי.

לאחר מכן פתח חלון הדמיה חדש. כעת, הפחת את מהירות הסריקה והגבר את עוצמת הלייזר. לאחר מכן החלף את הלחצן הרציף כדי להתחיל ולהפסיק את הסריקה. צפה בזהירות. ברגע שיש עלייה דרסטית בקרינה, סיים את הסריקה. לאחר מכן, חזור לחלון ההדמיה המקורי, ובחר במצב Live, ומצא את האזור שסומן זה עתה על ידי התאמת המיקוד.

אינדיקציה טובה לפציעה מוצלחת היא הופעת מכתש קטן, מבנה דמוי טבעת, או פסולת מקומית ממש על מקום הפציעה. אם עוצמת הלייזר הייתה גבוהה מדי, היה נראה אזור נזק גדול, שעלול להיות קטלני.