אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:19 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בתרבית דבקה של נוירונים אנושיים בוגרים בצלחת מצופה מטריצה.
הוסף וקטורים לנטי-ויראליים המקודדים חלבון טאו אנושי מוטנטי המותך למדווח חלבון פלואורסצנטי צהוב (YFP).
נגיף הלנטי נצמד לקולטני פני השטח של תא עצבי ספציפי, ומאפשר איחוי קרום מארח ויראלי ושחרור RNA ואנזימים ויראליים.
ה-RNA הנגיפי מועתק הפוך ל-DNA.
אינטגראז ויראלי מעביר את ה-DNA לתוך הגרעין, מקל על האינטגרציה בגנום המארח, ומוביל לייצור חלבון טאו מוטנטי מתויג YFP.
עם הזמן, הטאו המוטנטי יוצר אגרגטים ציטופלזמיים בתאים המומרים.
שטפו את התאים במדיה טרייה כדי להסיר חלקיקים נגיפיים שאינם מופנמים.
יש להמשיך בדגירה עם שינויים קבועים במדיה כדי לשמור על חיוניות עצבית ולקדם צבירת חלבונים.
דמיין את הנוירונים תחת מיקרוסקופ.
נוירונים שהומרו בהצלחה מציגים אגרגטים ציטופלזמיים של חלבון טאו מוטנטי מתויג YFP פלואורסצנטי.
כדי להמיר נוירונים עם lentivirus, השתמש בספירת טיטר של 340,000 יחידות הניתנות להתמרה לתא. לדלל את היחידות הניתנות להעברה במדיה של תרבית תאים לריכוז הדרוש, ולהוסיף אותן לתאים.
יומיים לאחר הוספת ה-lentivirus, שטפו את התאים פעם אחת בחומר טרי שאינו מכיל bFGF.
המשך לתרבית התאים ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במדיה ללא bFGF. שמרו על התאים במשך כשמונה שבועות לאחר ההעברה, והקפידו להחליף את אמצעי תרבית התאים כל יומיים. השתמש במ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים