תיוג והשתלה בתיווך ויראלי של תאי בולטות גנגליונים מדיאליים למחקרי in vivo
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 6:31 דק׳ • July 8th, 2025
קצור את רקמת הבולטות הגנגליונית המדיאלית, המכילה אבות בין-עצביים בקליפת המוח, מעוברי עכברים מהונדסים גנטית.
הוסף פולימר קטיוני ופרק את הרקמה לתרחיף חד-תאי.
הוסף וקטורים לנטי-ויראליים הנושאים מדווח GFP תלוי Cre recombinase המוקף באתרי לוקס. דגירה.
הפולימר מנטרל את המטענים הוויראליים וקרום התא המארח, ומאפשר היתוך ויראלי ושחרור RNA.
ה-RNA הנגיפי עובר העתקה הפוכה ומשולב בגנום המארח.
צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט. לספוג עודפי מדיה.
העבירו את התאים למשטח הידרופובי והעמיסו אותם למכשיר הזרקה.
הזריקו את התאים לקליפת המוח של גור עכבר מורדם.
אפשרו לגור להתאושש ולגדול.
האבות המושתלים מתמיינים לתאי עצב בוגרים בקליפת המוח.
תת-קבוצה של אינטרנוירונים אלה מבטאת במשותף Cre recombinase ו-RFP.
באינטרנוירונים אלה, Cre כורת את אתרי הלוקס, הופך את הגן GFP ומאפשר את ביטויו.
דמיין את הביטוי המשותף של RFP ו-GFP כדי לזהות אינטרנוירונים המבטאים Cre.
לאחר הכנת ה-lentivirus וניתוח ה-MGE לפי ההוראות בפרוטוקול הכתוב, אספו את שתי ההמיספרות של ה-MGE והכניסו את הרקמה לשני צינורות איסוף של 1.5 מיליליטר המכילים 500 מיקרוליטר של DMEM עם 10% FBS.
שמור את הדגימות על קרח עד שכל הרקמות נאספות. לאחר מכן העבירו את הצינורות למכסה מנוע מוסמך BSL-2. שאפו בזהירות את המדיה מבלי להפריע לרקמות ה-MGE המונחות בתחתית הצינור.
לאחר מכן
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים