מודל פלישת גידול מבוסס מטריקס באמצעות תרבית משותפת של מיקרוגליה גליובלסטומה

התחל בהוספת תרחיף קר של תאי גליובלסטומה ומיקרוגליה, שכל אחד מהם צבוע בצבע פלואורסצנטי מובהק, לתמיסת מטריצת פולימר קרה.

המצב הקר מונע פילמור מוקדם של המטריצה.

לאחר מכן, העבירו את התערובת לתוספת תא נקבובית בתוך צלחת תרבות.

דגירה כדי לאפשר פילמור מטריצה, ויוצר ג'ל המטמיע את התאים.

הוסף מדיה נטולת סרום לתוספת ומצע גידול המכיל סרום לבאר שמתחת, ולאחר מכן דגירה.

הגורמים הכימיים בסרום מקדמים נדידת תאים לעבר המדיה העשירה בסרום.

בנוסף, מיקרוגליה מפרישה מולקולות איתות המקיימות אינטראקציה עם תאי גליובלסטומה.

זה משפר את נדידת תאי הגליובלסטומה לצד התחתון של התוספת הנקבובית, בדומה לנדידתם מגידול לרקמה שמסביב.

הסר את התאים מהחלק העליון של החדר.

כעת, תקן את התאים הנותרים בעזרת מקבע ושטוף אותם עם מאגר. הקרינה הייחודית של התאים עוזרת לעקוב אחר נדידת התאים.

הפשירו את תערובת המטריצה בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר מכן, הכינו ריכוז של 10 מ"ג/מ"ל של מטריצה במדיה המתאימה על קרח. לאחר מכן, קצרו את התאים המסומנים להשעיה במטריצה כפי שהוצג קודם לכן. לאחר מכן, פיפטה 1.5 כפול 10 לתאי ה-GL261 החמישיים בנפח של 150 מיקרוליטר, ועוד חמש פעמים 10 לתאי המיקרוגליה הרביעיים ב-50 מיקרוליטר לתוך צינור מיקרופוגה של 1.5 מיליליטר.

הוסף 2 כפול 10 לתאי GL261 החמישיים בנפח של 200 מיקרוליטר לתוך צינור מיקרופוגה נפרד של 1.5 מיליליטר. סובב את התאים במיקרופוגה למשך חמש דקות ב -120 פעמים גרם. לאחר מכן, השעו מחדש את התאים ב-200 מיקרוליטר של מטריצה קרה על קרח.

לשלב זה, חיוני שיהיה מגש קרח מוכן במכסה המנוע. שמור צינורות על קצות הקרח במקרר. וודאו שהכל מקורר על מנת למנוע פילמור של הג'ל הבוגר בטרם עת.

לאחר ההשעיה מחדש, צלחו 50,000 תאים בנפח של 50 מיקרוליטר על מרכז התא העליון של תוספת תא בגודל 8 מיקרון. לאחר מכן, דגרו אותו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות כדי לאפשר פילמור. לאחר 30 דקות, הוסף 200 מיקרוליטר של מדיום נטול סרום לתא העליון ו-700 מיקרוליטר של סרום המכיל מדיום גידול תאים לבאר התחתונה.

לאחר דגירה של 48 שעות, הסר את התאים מהחלק העליון של החדר על ידי שאיפה עדינה. תקן את התאים כמו קודם, והחלף את הקיבוע ב-500 מיקרוליטר של 1X PBS לפני הדמיית התאים.