זיהום בנגיף הזיקה של תאי גזע עצביים עובריים

קח השעיה של נגיף הזיקה, נגיף פתוגני, בעל ריבוי הזיהום הרצוי, היחס בין חלקיקי הנגיף לתאים.

מערבבים את תרחיף הנגיף עם תאי גזע עצביים של מוח עוברי אנושי.

דגרו על התערובת, ואפשרו לנגיף להיקשר לקולטנים בתאים, מה שמקל על אנדוציטוזיס נגיפי.

לאחר מכן, צנטריפוגה את התערובת והשליכו את הסופרנטנט המכיל חלקיקים נגיפיים שאינם מופנמים.

השעו מחדש את התאים הנגועים בנגיף במדיה וזרעו אותם לתוך צלחת מרובת בארות מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית, המאפשרת הידבקות תאים.

דגרו את הצלחת.

נגיף הזיקה המופנם מנצל את מנגנון התא המארח כדי לייצר חלקיקים נגיפיים חדשים.

שכפול ויראלי משנה באופן משמעותי את המורפולוגיה של התאים, גורם לנזק לתאים ומקל על התפשטות הזיהום לתאים שכנים.

ניתן להשתמש בתאים הנגועים בנגיף הזיקה לניתוח נוסף.

השעו מחדש את הגלולה במלאי ZIKV בריבוי זיהום, או MOI, של בין 1 ל-10. נפח תמיסת ZIKV לא יעלה על 0.5 מיליליטר. דגרו את הדגימות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר מכן, הפוך את הצינור פעמיים-שלוש, וצנטריפוגה את התערובת ב-216 פעמים גרם בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות לקבלת כדור תא.

הסר את הסופרנטנט על ידי שאיפה. לאחר מכן השעו מחדש את התאים עם DPBS כדי לשטוף אותם. לאחר מכן, צנטריפוגה את התערובת ב -216 פעמים גרם למשך חמש דקות, והסר את הסופרנטנט על ידי שאיפה. השעו מחדש את התאים עם 12 מיליליטר מהמדיום