חקר גלגול לימפוציטים על פני חד-שכבת תא אנדותל מיקרו-וסקולרי

קח מיקרופלייט עם תוספות טרנסוול המצופות בחלבוני ECM כדי לקדם הידבקות תאים.

הוסף תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים של מוח אנושי, או HBMECs , לתוך התוספות ומצע גידול לתאים התחתונים.

דגירה, מה שמאפשר לתאים להיצמד ולצמוח לשכבה חד-שכבתית. תאים אלה מבטאים צמתים הדוקים, המחקים את האנדותל של מחסום הדם-מוח המגביל את מעבר התאים והמולקולות.

הסר את המדיום. הוסף תאים חד-גרעיניים של דם היקפי, או PBMCs, לתוספות ומדיום תרבית לתאים התחתונים.

דגירה, המאפשרת ללימפוציטים PBMC לקיים אינטראקציה עם תאי האנדותל ואז לעבור ביניהם, תהליך הנקרא גלגול.

שוטפים את תחתית התוספת, אוספים את התאים המועברים המודבקים לתאים התחתונים.

הציגו מיקרו-חרוזים פלואורסצנטיים כהתייחסות לכימות תאים.

העבירו את התרחיף לתוך צינור, צנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש בקוקטייל נוגדנים מצומד פלואורופור כדי לסמן את הלימפוציטים.

הלימפוציטים המועברים מוכנים לכימות באמצעות ציטומטריית זרימה.

כדי להכין את תוספות תרבית התאים לבדיקת גלגול, ראשית, הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת פיברונקטין לכל תוספת ולבאר אחת של צלחת תחתונה שטוחה של 96 בארות. לאחר שלוש שעות ב-37 מעלות צלזיוס, החלף את תמיסת הפיברונקטין ב-100 מיקרוליטר HBMEC, והוסף 600 מיקרוליטר של מדיום ECM-b טרי לתאים התחתונים של תוספות תרבית התאים.

לאחר מכן, החזירו את הצלחות לחממת תרבית התאים למשך