מדידת אזור האוטם ובצקת מוחית במוח חולדה לאחר חסימת עורק המוח האמצעי

קחו חולדה הנתונה לחסימת עורק המוח האמצעי, המגבילה את זרימת הדם להמיספרה הימנית של המוח.

אספקת דם מופחתת מונעת מתאי המוח חמצן, משבשת את ויסות המים, גורמת לנפיחות או בצקת בתאים ומובילה להפרעה במחסום הדם-מוח.

תאים פגומים מתים בסופו של דבר, ויוצרים אזור אוטם.

הזריק צבע כחול לווריד הזנב של החולדה כדי לזהות הפרעה ב-BBB.

קצרו את המוח, חתכו אותו עם סכיני גילוח ודגרו את הפרוסות בתמיסת צבע חמצון.

בתאים חיים, הצבע מגיב עם דהידרוגנאזות מיטוכונדריאליות ועובר הפחתה, והופך רקמה בת קיימא לאדומה.

אזורים עם אוטם, חסרי פעילות דהידרוגנאז, נשארים לבנים.

סרוק את הפרוסות לקבלת תמונות ברזולוציה גבוהה.

באמצעות תוכנת ניתוח תמונות, החל מסנן כחול כדי לבטל את צבע הצבע הכחול, והמר את התמונות לגווני אפור.

החל סף כדי להבחין בין רקמה שחורה בריאה לרקמה לבנה עם אוטם.

חשב את אזור האוטם ובצקת המוח כאחוז מחצי הכדור הנגדי הלא מושפע.

כדי להתחיל, הסר את מוח החולדה וחתוך קטעים אופקיים בעובי 2 מילימטר עם סכין גילוח חד קצה לא מצופה מנירוסטה בגודל 0.009 אינץ'. מניחים את החלקים ב-0.005% TTC ומדגרים אותם למשך 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הניחו את רקמת המוח על שקופיות המיקרוסקופ ובצעו סריקה אופטית של שש פרוסות המוח ברזולוציה של 1,600 על 1,600 DPI. השתמש בעורך תמונות כדי להוסיף מסנן כחול לתמונות.

לאחר פתיחת התוכנה, עבור אל תמונה, התאמות ומיקסר ערוצים. בחר כחול כערוץ הפלט וסמן מונוכרום. לאחר מכן לחץ על OK. שמור את התמונה בתבנית קובץ JPEG. השתמש בכלי בחירת המצולע ב-ImageJ גרסה 1.37 כדי לבחור כל חצי כדור של כל אחת משש פרוסות המוח ולשמור אותו כקובץ תמונה נפרד.

כדי לחשב את נפח האוטם ואת בצקת המוח, השתמש במאקרו כדי להמיר את הפיקסלים בתמונה ללבן או שחור על סמך סף. לאחר מכן, סגור את כל הקבצים והשתמש במאקרו שני כדי להשוות את מספר הפיקסלים הלבנים והשחורים כדי לקבוע את עוצמת האוטם ואת בצקת המוח. העתק את הנתונים הגולמיים לגיליון אלקטרוני. בעת חישוב נפח האוטם, תקן את נפיחות הרקמות באמצעות היחסים של חצאי המוח המקבילים והנגדיים. בטא את אזורי הבצקת במוח כאחוז מהאזורים הסטנדרטיים של ההמיספרה הנגדית הבלתי מושפעת.