הערכת התנגדות חשמלית טרנסאנדותל במודל מחסום דם-מוח במבחנה

התחל עם תוספת ממברנה המכילה תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים של מוח עכבר, הדומה למחסום דם-מוח במבחנה.

הנח את התוספת הזו לתוך התנגדות חשמלית טרנסאנדותל או מכשיר TEER המכיל היטב אלקטרודה משובצת.

הוסף מדיה חדשה לתא התחתון.

הנח את המכסה עם האלקטרודות מעל בארות ה-TEER, ואז הכניס את המכשיר לחממה וחבר אותו למערכת הקלטה.

האלקטרודות מייצרות זרם חשמלי על פני שכבת התא למדידת התנגדות טרנסאנדותלית.

חלבוני צומת שלמים בין התאים מעכבים את זרימת הזרם, וכתוצאה מכך ערך TEER גבוה יותר.

נתק את המכשיר והסר אותו.

פרק את המכסה, הסר מעט מדיום מהתא העליון והוסף תאי T שהופעלו מראש. הרכיבו מחדש את המכשיר למדידת TEER.

תאי T מופעלים מקיימים אינטראקציה עם תאי האנדותל, משחררים גורמים דלקתיים ואנזימים ציטוליטיים, ומשבשים את שלמות הצומת.

הפרעה זו מגבירה את זרימת הזרם החשמלי, וכתוצאה מכך ערך TEER נמוך יותר.

כדי להגדיר מדידת TER, הנח את מודול 24 הבארות של מכשיר ה-TEER במכסה הזרימה הלמינרית. הסר את המכסים והנח את התוספות עם MBMECs במכשיר באמצעות מלקחיים.

לאחר מכן, פיפטה 810 מיקרוליטר מהמדיום הטרי לתא התחתון של בארות המודול. הוסף אותו בזהירות בין התוספת לקיר המודול היטב. לאחר מכן, סגרו את המכסים והניחו את המכשיר בחממה. חבר את המכשיר למחשב. לאחר מכן, הפעל את בקר המכשיר ופתח את התוכנה.

בחלון המוקפץ, בחר 'מדידה חדשה'. סמן את התיבות 'הצג TEER' ו'הצג Ccl' ולאחר מכן לחץ על 'התחל'. לאחר השלמת המדידה הראשונה, בחר 'בדוק את כל הבארות' בכרטיסייה 'תוצאות' כדי לראות את כל ערכי TEER ו-Ccl. לאחר מכן שמור את הקובץ.

לאחר מכן, בחר את נקודת הזמן לתרבית משותפת של MBMECs עם תאי T כאשר Ccl יציב ונמוך מ-1 מיקרו-פאראד לסנטימטר רבוע ו-TEER הגיע לרמתו המקסימלית. בדוק בזהירות את ערכי ה-TEER וה-Ccl המוחלטים, והוצא את הבארות שבהן MBMECs לא פיתחו חד-שכבות מספיק על ידי ביטול הסימון של בארות כאלה.

קבץ את שאר הבארות על ידי לחיצה ימנית על הבארות ובחירה באפשרות 'הוסף באר לבאר ממוצעת חדשה'. תן לו שם בחלון המוקפץ ועשה את אותו הדבר עבור כל הבארות הבודדות שיש לקבץ. לאחר מכן, בדוק את כל הבארות הממוצעות כדי לוודא שלכולן יש את אותם התנאים הראשוניים לפני התרבות המשותפת.

בכרטיסייה 'ניסוי', לחץ על 'השהה'. נתק את המכשיר והוציא אותו מהחממה. לאחר מכן, הסר את המכסים במכסה המנוע הלמינר. לאחר מכן, הסר חלק מהמדיום מה-Insert בתא הבאר העליון. הוסף תאי T ל-MBMECs על ידי פיפטינג בזהירות של 150 מיקרוליטר של מדיום. לאחר מכן, חבר מחדש את המכשיר ולחץ על 'המשך מדידה'. לאחר 24 שעות, לחץ על 'עצור' בכרטיסייה 'ניסוי' ושמור את הקובץ.