מדידת ספיגת דופמין בסינפטוזומים במוח עכבר באמצעות דופמין עם תווית רדיו

קצור סינפטוזומים, מבנים הקשורים לממברנה שמקורם במסופים הפרה-סינפטיים השלמים של סינפסות עצביות המכילות מובילי דופמין (DAT), ממוח עכבר.

מלאו מבחנות במאגר המכיל ליגנדים ומבחנות ייחוס עם מאגר המכיל ליגנדים ומעכב DAT.

הוסף את הסינפטוזומים.

הליגנדים מעכבים אנזימים מפרקי דופמין וטרנספורטרים אחרים, ומונעים פירוק דופמין וספיגה לא ספציפית.

הציגו דופמין ללא תווית ועם תווית רדיו.

בתנאי הבדיקה, DAT סינפטוזומלי לוקח את הדופמין.

בתנאי הייחוס, המעכב מונע ספיגת דופמין בתיווך DAT, ומאפשר ספיגת רקע בלבד.

הוסף את הדגימות למסנני מיקרופייבר השומרים על הסינפטוזומים.

שטפו כדי להסיר דופמין לא קשור.

מעבירים את המסננים לצינורות נצנוץ.

הוסף נוזל נצנוץ המכיל תרכובת רגישה לקרינה.

הניחו את הצינורות בדלפק נצנוץ.

פליטות רדיואקטיביות מדופמין מעוררות את התרכובת לפלוט אור, הנמדד על ידי המונה.

הפחת את ההפניה מנתוני הבדיקה כדי למדוד את ספיגת הדופמין הסינפטוזומלי.

בשלב זה, הוסף 440 מיקרוליטר של מאגר קליטה, ליגנד וקוקאין ל-12 צינורות מיקרו-צנטריפוגה ייעודיים של 1.5 מיליליטר, ו-440 מיקרוליטר של מאגר קליטה וליגנד ל-36 צינורות המיקרו-צנטריפוגה הנותרים של 1.5 מיליליטר. סמן 6 צינורות מיקרו-צנטריפוגה של 2 מיליליטר כ-10, 5, 2.5, 1.25, 0.62 ו-0.31. לאחר מכן הוסף 750 מיקרוליטר של מאגר קליטה וליגנד ל-5 צינורות המיקרו-צנטריפוגה עם