אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:39 דק׳ • July 8th, 2025
קחו למשל צלחות פטרי המכילות פיזור אחיד של מזון תולעים על מצעי גידול נמטודות.
הפוך כל צלחת וסמן את המרכז.
בעזרת מיקרוסקופ, הכניסו תולעי Caenorhabditis elegans למקום המסומן במרכז.
לאחר מכן, הכניסו תולעים תואמות גיל לצלחות הנותרות.
תולעים אלה מבטאות את הצורות הפראיות או המוטנטיות של חלבון קושר RNA אנושי, היוצר אגרגטים רעילים בציטופלזמה העצבית, ומוביל למוות עצבי.
זה מפחית את יכולתן של התולעים לשלוט בתנועות השרירים, וכתוצאה מכך לפגיעה בתפקוד המוטורי.
אפשר לתולעים לזחול לתקופה מוגדרת.
בעזרת מיקרוסקופ, סמן את המיקום הסופי של כל תולעת.
מדוד את המרחק הרדיאלי שעברו התולעים מהנקודה המרכזית למיקומם הסופי.
בהשוואה לביקורת, תולעים המבטאות רמות נמוכות יותר של חלבון מסוג בר מראות ליקוי מוטורי קל, אלה עם רמות גבוהות יותר של חלבון מסוג בר מראים ליקוי בינוני, ואלה עם החלבון המוטנטי מציגים ליקוי חמור.
הפוך את לוחות הבדיקה של NGM הפוך, וסמן את החלק התחתון עם מזהה עבור זני C. elegans שיש לבדוק. צרו נקודה קטנה עם הטוש במרכז הצלחת ההפוכה. תוך כדי עבודה עם מיקרוסקופ מנתח, העבירו תולעים למרכז לוחית הבדיקה, והגדירו טיימר למשך 30 דקות. החזירו את המכסה לצלחת והניחו בצד. המשך להעביר תולעים עד שכל הזנים נמצאים על לוחות הבדיקה המיועדים.
לאחר 30 דקות, התחל להבקיע את הצלחת הראשונה על ידי הסרת המכסה והנחת הצלחת עם הפנים כלפי מטה מתחת למיקרוסקופ הניתוח. כוונן את מיקוד המיקרוסקופ עד שכל התולעים נראות דרך האגר. בעזרת עט קצה לבד בצבע שונה מנקודת המרכז, הניחו נקודה קטנה במיקום של כל תולעת.
בדוק את קצה הצלחת, מכיוון שחלק מהתולעים עלולות להגיע לשם. כמו כן, ספרו ורשמו כמה תולעים לא זזו מנקודת המרכז. מדדו את המרחק מנקודת המרכז לסימוני המיקום הסופיים של כל תולעת, ורשמו את המרחק באמצעות סרגל. נקודת התולעת הראשונה מסומנת במקף. רשום נתוני אורך עבור כל נקודה ברצף על-ידי סיבוב הלוח בכיוון השעון.