הכלאה באתרה באמצעות בדיקות אוליגונוקלאוטידים לחקר ביטוי RNA בחלקי מוח של חולדות

קח קטעי מוח קבועים מחולדה עם תסמונת סרוטונין, מה שמוביל לשינוי בסינתזת RNA של קולטן סרוטונין בנוירונים.

ייבשו את הרקמה באמצעות אלכוהול. החל תמיסת טיפול מקדים כדי לנטרל אנזימים הידרוליזה אנדוגניים, ולמנוע את האינטראקציה שלהם עם ריאגנטים לזיהוי.

טפל עם מאגר רותח כדי לשבור קישורים צולבים המושרים על ידי קיבוע, ולחשוף את RNA המטרה.

יבש את הרקמה, צייר מחסום הידרופובי ודגר אותה בתמיסה לחדירת ממברנות התאים.

הוסף בדיקות אוליגונוקלאוטידים ודגר, מה שמאפשר לבדיקות להכלאה עם RNA המטרה.

שטפו כדי להסיר בדיקות לא קשורות, ולאחר מכן דגרו עם ריאגנטים להגברה המכילים בדיקות תווית מצומדות לאנזים, הנקשרות לבדיקות האוליגונוקלאוטיד.

דגירה עם מצעים כרומוגניים שעוברים הידרוליזה על ידי הבדיקות המצומדות לאנזים, ומייצרות צבע גלוי.

טפל בקסילן כדי להגביר את שקיפות הרקמות, הוסף מדיום הרכבה והחל כיסוי.

תחת מיקרוסקופ, כתמים צבעוניים ברקמה עוזרים לכמת את ביטוי ה-RNA המטרה.

בהליך זה, להתייבשות, קח ארבע שקופיות לקופסאות שקופיות מיקרוסקופ המאוחסנות במקפיא שלילי של 80 מעלות צלזיוס. הקצה את הסעיפים לבדיקות של גנים ppiB, dapB ו-ht2a. סמן ותייג אותם בעט כדורי.

לאחר מכן, טבלו את המגלשות ב-100% אלכוהול בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות. לאחר מכן, יבש את השקופיות במשך חמש דקות במכסה האדים. לטיפול מקדים, פיפטה 20 מיקרוליטר של הטיפול